[發(fā)明專利]識別MBOAT2的TCR

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110814401.0
• 申請日: 2021-07-19
• 公開（公告）號: CN113527464A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭松明;安多;鐘山
• 申請（專利權(quán)）人: 新景智源生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K14/725
• 分類號: C07K14/725;C12N15/12;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

本發(fā)明公開了一種識別MBOAT2的TCR，其是首例能夠識別MBOAT2p.R43Q突變產(chǎn)生的新生抗原的TCR。針對MBOAT2p.R43Q突變產(chǎn)生的新生抗原,正常氨基酸序列為AAIWFRTYL，新生抗原氨基酸序列為AAIWFQTYL，抗原呈遞分子為HLA?C03:04，發(fā)明了一種能夠特異性識別MBOAT2p.R43Q突變的TCR，其可以用于基因編輯改造T細(xì)胞，改造過的T細(xì)胞能夠特異性識別含有該突變的腫瘤新生抗原，進(jìn)而可以用于TCR?T療法，殺死腫瘤細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫療法領(lǐng)域，更具體地說，它涉及識別MBOAT2突變產(chǎn)生的新生抗原的TCR。

背景技術(shù)

惡性腫瘤，作為中國居民死亡主要原因之一，發(fā)病率以每年3.9％的增幅增長，死亡率保持每年2.5％的增幅。全國每年有超300萬人確診患有癌癥，平均每天確診超過1萬人。中國癌癥高發(fā)病前十的惡性腫瘤，均為實(shí)體腫瘤。

過繼性免疫細(xì)胞技術(shù)，以利用人體免疫系統(tǒng)殺傷癌細(xì)胞、病原體為目的，一般先采集病患自身T細(xì)胞，在體外擴(kuò)增自體T細(xì)胞和/或優(yōu)化該T細(xì)胞靶向性后，再向病患回輸抗癌能力增強(qiáng)的T細(xì)胞；因?yàn)橐宰泽wT細(xì)胞為底物，所以相較傳統(tǒng)療法，過繼性免疫細(xì)胞技術(shù)具有低毒副作用、低耐藥性等優(yōu)勢。其中，針對腫瘤新生抗原的TCR-T療法，被認(rèn)為是能夠攻克實(shí)體腫瘤最有效的治療手段之一。

MBOAT2(膜結(jié)合O-酰基轉(zhuǎn)運(yùn)酶結(jié)構(gòu)域2)基因編碼一種催化將?；o酶中的酰基轉(zhuǎn)運(yùn)到水解磷脂的酰基轉(zhuǎn)運(yùn)酶，參與磷脂重構(gòu)通路中的再?；^程。在大鼠食道鱗狀細(xì)胞癌模型中的研究發(fā)現(xiàn)，MBOAT2是miR-31的靶基因之一，而miR-31是在包括結(jié)直腸癌、食道癌等多種類型的腫瘤中最常見的過表達(dá)并致癌的microRNA之一。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，MBOAT2基因位點(diǎn)同時(shí)轉(zhuǎn)錄一段環(huán)狀RNA circMBOAT2，其在結(jié)直腸癌樣本中及患者血清中高度表達(dá)并與腫瘤分期及預(yù)后相關(guān)，可以作為潛在的結(jié)直腸癌生物標(biāo)志物。根據(jù)TCGA的數(shù)據(jù)，MBOAT2p.R43Q突變發(fā)生頻率較高的腫瘤類型包括直腸癌(2.2％)和子宮內(nèi)膜癌(1.1％)。

發(fā)明內(nèi)容

應(yīng)用基因編輯技術(shù)，改造的含有本發(fā)明的識別MBOAT2的TCR組合的T細(xì)胞，可以特異性殺傷通過HLA-C03:04呈遞抗原肽AAIWFQTYL的細(xì)胞，其可以用于TCR-T療法的開發(fā)應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了識別MBOAT2的TCR，其包括TCRα鏈和TCRβ鏈；其中，TCRα鏈包括互補(bǔ)決定區(qū)CDR3，CDR3與選自SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，TCRβ鏈包括互補(bǔ)決定區(qū)CDR3，CDR3與選自SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性。

至少70％的序列同一性：包括至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的序列同一性。

在一些實(shí)施方案中，所述TCRα鏈包括三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1選自SEQ ID NO:1，CDR2選自SEQ ID NO:2，CDR3選自SEQ ID NO:3。

在一些實(shí)施方案中，所述TCRα鏈還包括四個(gè)框架區(qū)FR1、FR2、FR3和FR4，其中FR1選自SEQ ID NO:7，F(xiàn)R2選自SEQ ID NO:8，F(xiàn)R3選自SEQ ID NO:9，F(xiàn)R4選自SEQ ID NO:10。

在一些實(shí)施方案中，所述的識別MBOAT2的TCR，所述TCRβ鏈包括三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1選自SEQ ID NO:4，CDR2選自SEQ ID NO:5，CDR3選自SEQ IDNO:6