[發(fā)明專利]采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法

有效

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• 申請日: 2021-07-15
• 公開（公告）號: CN113440547B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李坤平;郭姣
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: A61K36/28
• 分類號: A61K36/28;B01D15/10;B01D15/42
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

1.一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）以大薊地上部分為原料，純水加熱提取，提取液粗濾，得到粗提液，將粗提液絮凝沉降，取上清液過濾，得到澄清上清液；

（2）將澄清上清液經(jīng)大孔樹脂富集，洗脫、濃縮，膜過濾，得到膜濾液；

（3）將膜濾液經(jīng)動態(tài)軸向壓縮柱層析純化，采用LC-qTOF-MS精確分子量快速鑒定和對照品保留時間鎖定的方法，收集含柳穿魚葉苷和蒙花苷的流份，濃縮、干燥，得到大薊總苷；

所述動態(tài)軸向壓縮柱以C₁₈反相硅膠鍵合相為填料；甲醇為流動相A和0.05% 甲酸水溶液為流動相B；梯度洗脫，洗脫程序為0~17 min，95%B→44% B；17~21min，44%B → 38%B；21~32 min，38%B→ 5%B；32~35 min，5％B→5％B；35～37min，5％→95％B；37～45min，95％B→95％B；流速 70 mL·min^-1，檢測波長為 254nm和330 nm，柱溫25 ℃，進樣量10mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述純水提取時間為1-4小時，提取溫度為90-95℃，提取次數(shù)為1-2次，料液比為1﹕10-30。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述提取液粗濾是采用90~100μm燒結(jié)金屬濾頭接真空泵對提取液進行過濾。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述取上清液過濾是采用50~60μm燒結(jié)金屬濾頭接真空泵對上清液進行過濾。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述大孔樹脂的種類為AB-8 或D-101，洗脫溶劑為60-95%的甲醇或乙醇。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述干燥為冷凍干燥或真空加熱干燥。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用大孔樹脂串聯(lián)動態(tài)軸向壓縮柱分離純化大薊總苷的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述柳穿魚葉苷和蒙花苷的qTOF-MS m/z([M-H]^-)分別為621.1755±0.05Da和591.1654±0.05Da，動態(tài)軸向壓縮柱色譜保留時間約為24.45±0.2min。

8.權(quán)利要求1-7任一項所述的方法制備得到的大薊總苷，其特征在于，所述大薊總苷中主要包括2種組份：柳穿魚葉苷和蒙花苷，其中柳穿魚葉苷和蒙花苷的總重量含量不小于90%。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的大薊總苷，其特征在于，其中柳穿魚葉苷的重量含量為75-85%，蒙花苷的重量含量為5-15%。