[發明專利]一種用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針以及試劑盒

有效

• 申請號: 202110784627.0
• 申請日: 2021-07-12
• 公開（公告）號: CN113337618B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 劉立兵;王建昌;婁巧哲;王金鳳;孫曉霞;付琦
• 申請（專利權）人: 石家莊海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 河北國維致遠知識產權代理有限公司 13137
• 代理人: 任青

本發明涉及基因檢測技術領域，具體公開一種用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針以及試劑盒。所述引物的序列為：上游引物：5′?TTGCCCTTGGAGTTCGACTAAC?3′；下游引物：5′?GCAGCTGTTGCGATTAGTTGAA?3′；所述探針的序列為：5′?CCAACCTTACAGCCGGCCACCTTC?3′。本發明設計的用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針能夠快速準確的從所有親緣近似種和生態近似種中檢測出日本鯖，檢測方法具有特異性好、靈敏度高和簡單快捷等優勢，對日本鯖的準確快速鑒別和食品安全保障具有重要的意義。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，尤其涉及一種用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針以及試劑盒。

背景技術

日本鯖是一種很常見的可食用魚類，其蛋白質含量較高，在我國沿岸、朝鮮及日本海域等海洋漁業中占據重要地位。但是，日本鯖高蛋白含量中的組氨酸占比較高，若其離開水面沒有盡快食用，或者經過上時間的運輸后，體內會大量繁殖沙門氏菌、鏈球菌等細菌，進而將魚肉內的組氨酸轉化為有毒的組胺，而食入高組胺魚肉后常會引起過敏，多表現為顏面或全身皮膚潮紅、結膜充血、頭暈、口干、心悸、四肢無力等癥狀，常被人們俗稱為“組胺中毒”。因此，選擇日本鯖的食用時間非常重要。

日本鯖與澳洲鯖為近種，通過其形貌很難區分，若是加工處理后則更是難以辨別。同時，日本鯖經過加工處理后其肉質與鱈魚、羅非魚、巴沙魚、金槍魚、鯉魚、三文魚、低眼巨鯰、虹鱒、大馬哈魚和鯰魚也極難區分，為了保證食品安全，避免長時間不正規儲存的加工日本鯖魚肉出現在市場上或者冒充其它魚種，研究快速辨別日本鯖的方法非常關鍵。因通過外形較難區分日本鯖，目前的研究人員開始開發從分子水平進行鑒別方法。由于日本鯖與其它同科物種的基因序列同源性較高，根據其基因組設計具有特異性的擴增引物和探針較為困難。目前研究人員通過DNAMAN軟件大量比對分析相同物種的基因組序列，選取其它同科物種與日本鯖基因組DNA的差異序列來設計引物，但是到目前為止，公開的現有技術中均未找到一組可以在澳洲鯖、鱈魚、羅非魚、巴沙魚、金槍魚、鯉魚、三文魚、低眼巨鯰、虹鱒、大馬哈魚、鯰魚和日本鯖中能特異性的擴增并鑒別出日本鯖的引物。

發明內容

針對現有日本鯖的鑒別方法存在的上述技術問題，本發明提供一種用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針以及試劑盒，該用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針可以特異性的在眾多近種魚類中鑒別出日本鯖，并且具有較高的靈敏度，在日本鯖的鑒別方法中具有重要的應用價值。

為達到上述發明目的，本發明實施例采用了如下的技術方案：

一種用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針，所述引物的序列為：

上游引物：5′-TTGCCCTTGGAGTTCGACTAAC-3′；

下游引物：5′-GCAGCTGTTGCGATTAGTTGAA-3′；

所述探針的序列為：5′-CCAACCTTACAGCCGGCCACCTTC-3′。

相對于現有技術，本發明提供的用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針具有特異性高和靈敏度好的優勢。用所述引物和探針對日本鯖以及日本鯖的11種親緣近似種和生態近似種(鱈魚、羅非魚、巴沙魚、金槍魚、鯉魚、三文魚、低眼巨鯰、虹鱒、大馬哈魚、鯰魚和澳洲鯖)的基因組DNA進行實時熒光PCR擴增檢測，該實時熒光PCR檢測用引物和探針只能在含有以日本鯖的基因組DNA為模板的體系中得到擴增產物，其他親緣近似種和生態近似種都無法得到擴增產物，即通過實時熒光檢測結果就可直觀判斷出檢測的樣品是否為日本鯖。因此，通過本發明設計的用于檢測日本鯖的實時熒光PCR引物和探針能夠快速準確的從眾多日本鯖親緣近似種和生態近似種中檢測出日本鯖，檢測方法簡單快捷，對日本鯖的準確快速鑒別和食品安全保障具有重要的意義。

優選的，所述探針的5′連接有熒光基團，所述探針的3′端連接有淬滅基團。