[發明專利]一種大鼠血管平滑肌細胞培養基及其應用

在審

• 申請號: 202110782107.6
• 申請日: 2021-07-12
• 公開（公告）號: CN113388576A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 郭利偉;李端;王藝凱;李世杰;楊婷婷
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 河南省古格知識產權代理事務所(普通合伙) 41197
• 代理人: 陳娟

1.一種大鼠血管平滑肌細胞培養基，其特征在于，包括DMEM高糖培養基、胎牛血清、青霉素-鏈霉素混合液和大鼠血小板源性生長因子B。

2.如權利要求1所述的大鼠血管平滑肌細胞培養基，其特征在于，所述胎牛血清的體積分數為15%～25%，所述青霉素-鏈霉素混合液的體積分數為0.5%～2%，所述大鼠血小板源性生長因子B的終濃度為5ug/L～20ug/L。

3.如權利要求2所述的大鼠血管平滑肌細胞培養基，其特征在于，所述胎牛血清的體積分數優選為20%，所述青霉素-鏈霉素混合液的體積分數優選為1%，所述大鼠血小板源性生長因子B的終濃度優選為10ug/L。

4.權利要求1至3任一項所述的大鼠血管平滑肌細胞培養基在培養大鼠血管平滑肌細胞中的應用。

5.一種大鼠血管平滑肌細胞的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，將細胞培養瓶平向放置，采用鼠尾膠原蛋白Ⅰ型包被細胞培養瓶的瓶壁；

步驟2，獲取大鼠胸腹主動脈，清洗并剪成0.8 mm²～1.5mm²的組織塊；

步驟3，將步驟2獲得的組織塊貼放于經步驟1處理的細胞培養瓶之包被有鼠尾膠原蛋白Ⅰ型的瓶壁上；

步驟4，將經步驟3處理的細胞培養瓶豎向放置，加入如權利要求1至3任一項所述的大鼠血管平滑肌細胞培養基，并豎向置于培養箱中靜置培養2h；

步驟5，將經步驟4處理的細胞培養瓶平向放置，使組織塊浸沒于大鼠血管平滑肌細胞培養基中進行培養，獲得大鼠血管平滑肌細胞。

6.如權利要求5所述的大鼠血管平滑肌細胞的培養方法，其特征在于，所述步驟1中，采用濃度為0.36 g/L的乙酸將鼠尾膠原蛋白Ⅰ型稀釋至濃度為0.012 mg/mL～0.015 g/L后進行包被處理。

7.如權利要求5所述的大鼠血管平滑肌細胞的培養方法，其特征在于，所述步驟2包括如下步驟：

步驟2.1，選擇四周齡、重量150g的大鼠，處死后置于75%乙醇中浸泡消毒3 min；

步驟2.2，分離取出大鼠胸、腹主動脈，放入預冷的含雙抗的PBS緩沖液中，反復浸洗2～3遍，并去除血管外膜的脂肪和纖維組織；其中，所述雙抗為青霉素和鏈霉素的混合液；

步驟2.3，縱向剪開血管腔，去除血管內皮細胞，采用預冷的含雙抗PBS緩沖液洗至少1遍；

步驟2.4，將經步驟2.3處理的血管段置于0.25%胰蛋白酶溶液中預消化10min，然后置入預冷的如權利要求1至3任一項所述的大鼠血管平滑肌細胞培養基中，剪成組織塊。

8.如權利要求5所述的大鼠血管平滑肌細胞的培養方法，其特征在于，所述步驟3中，任意相鄰兩個所述組織塊之間的距離為3mm～5mm。

9.如權利要求5所述的大鼠血管平滑肌細胞的培養方法，其特征在于，所述步驟4中，將所述細胞培養瓶豎向靜置于37℃、5% CO₂飽和濕度的培養箱中。

10.如權利要求5所述的大鼠血管平滑肌細胞的培養方法，其特征在于，所述步驟5中，培養四天后，第一次更換所述大鼠血管平滑肌細胞培養基，以后每隔五天更換一次所述大鼠血管平滑肌細胞培養基。