[發明專利]用于檢測HIV感染者免疫重建狀況的試劑和方法

在審

• 申請號: 202110780911.0
• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN113584149A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 金聰;張鑫;何林
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯知杰知識產權代理有限公司 11587
• 代理人: 楊巍;柴春玲

本發明提供了用于表達干擾素刺激基因(Interferon stimulatedgenes)IFI27和IFI6的引物組、探針、試劑盒、以及其用于評價艾滋病感染者免疫重建狀況的用途。

技術領域

本發明涉及艾滋病(HIV)感染者免疫重建狀況的檢測領域，具體地涉及一種用于表達干擾素刺激基因IFI27和/或IFI6的引物組、探針、試劑盒及其用于檢測HIV感染者免疫重建狀況的應用。

背景技術

艾滋病的抗病毒治療能夠有效抑制病毒復制，但仍有20％-30％經治療的感染者不能實現有效的免疫重建，盡管HIV病毒載量得到了有效的控制，但CD4⁺T淋巴細胞一直處于較低的水平，這些感染者被稱為“免疫不應答者”。這些感染者“非AIDS相關疾病”的發病率和病死率遠高于免疫應答的患者。目前，國內外未有對HIV感染者的免疫重建狀況進行早期評價的成熟方法。

在現有技術中，病毒載量和CD4⁺T細胞這兩個臨床用于評價治療效果的常規指標不適于評價HIV感染者的免疫重建狀況。一方面，由于參與改善免疫重建水平臨床治療研究的HIV感染者都經歷了長期抗病毒治療，這些患者的病毒載量已經很低，不能用病毒載量來評價新型治療方案的療效。另一方面，臨床評價病人免疫重建主要依賴CD4⁺T淋巴細胞的計數，但大多數HIV感染者在治療后CD4⁺T細胞數目增長緩慢，短時間內難以看到CD4⁺T細胞的顯著提高，通常治療多年后才能獲知病人免疫重建是否良好，以致延緩對病人進行CD4⁺T淋巴細胞重建的輔助性治療，且長時間的觀察會顯著增加成本嚴重制約臨床實驗的開展。迄今為止，評價免疫不應答者的CD4⁺T細胞的重建水平尚無特異的臨床檢測指標和有效的臨床檢測工具。因此，亟需建立新型的評價免疫重建狀況的手段。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測艾滋病感染者免疫重建狀況的新手段。本申請的發明人將人源化動物模型和臨床隊列樣本結合，通過流式細胞分選技術和RNA-seq技術篩選鑒定出與HIV臨床療效最為相關的干擾素刺激基因(Interferon stimulated genes，以下簡稱ISG)，并將其用作評價HIV感染者中非特異性免疫活化的指標，設計特異性引物組和探針，選擇合適的內標，建立了臨床適用的實時熒光定量PCR檢測方法，為評價HIV感染者的免疫重建狀況提供切實可行的新手段，由此得到本發明。

因此，在第一方面，本發明提供了針對干擾素刺激基因IFI27的引物組，包括：

IFI27上游引物：GGGAATCGCCTCGTCCTC(SEQ ID NO:1)，以及

IFI27下游引物：GTAGAACCTCGCAATGACAGC(SEQ ID NO:2)。

在第二方面，本發明提供了針對干擾素刺激基因IFI27的探針，包括：

IFI27探針：CCCAGTGACTGCAGAGTAGCCACA(SEQ ID NO:3)。

在第三方面，本發明提供了針對干擾素刺激基因IFI6的引物組，包括：

IFI6上游引物：TGATGAGCTGGTCTGCGA(SEQ ID NO:4)，以及

IFI6下游引物：ATCAGGGCACCAATATTACCTA(SEQ ID NO:5)。

在第四方面，本發明提供了針對干擾素刺激基因IFI6的探針，包括：

IFI6探針：CTGCCACCAGCCCCGAGG(SEQ ID NO:6)。

在第五方面，本發明提供了一種用于檢測干擾素刺激基因IFI27和/或IFI6的表達水平的試劑盒，所述試劑盒包括：

-本發明第一方面和/或第三方面的引物組；以及