[發明專利]基于CRISPR-Cas13a系統特異性靶向F3-T3融合基因的crRNA及應用

有效

• 申請號: 202110779966.X
• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN113528523B
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 康春生;武燁;王琦雪
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學總醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 王雨杰

本發明創造提供了基于CRISPR?Cas13a系統特異性靶向F3?T3融合基因的crRNA及應用，所述crRNA的序列如SEQID NO：1所示。本發明創造所述的crRNA介導的CRISPR?Cas13a基因編輯系統能夠明顯抑制膠質瘤細胞增殖。

技術領域

本發明創造屬于生物領域，尤其是涉及基于CRISPR-Cas13a系統特異性靶向F3-T3融合基因的crRNA及應用。

背景技術

Cas13a是一種RNA引導的CRISPR效應子，能靶向并切割單鏈RNA(ssRNA)，作為RNA病毒感染性疾病和惡性腫瘤的治療和診斷工具，引起了極大的關注。CRISPR-Cas13a系統由兩個部分組成，包括靶向RNA的CRISPR-RNA(crRNA)和由crRNA引導的RNA酶Cas13a。迄今為止，CRISPR-Cas13a系統被認為是一種在轉錄水平上直接抑制基因表達的方法。與Cas9相比，Cas13a提供了一種可能更安全的替代方案，因為它會導致功能表型喪失，但不會擾亂基因組。更加重要的是，Cas13a具有獨特的“附帶切割”效應：在識別其靶RNA后，活化的Cas13a不僅對靶RNA表現出切割作用，而且對非靶RNA也表現出切割作用。

FGFR3-TACC3(F3-T3)融合基因首次在膠質母細胞瘤樣本中報道，已成為多種癌癥的致癌驅動因子，包括尿路上皮癌、非小細胞肺癌、宮頸癌、頭頸癌、胃腸道癌惡性腫瘤和惡性黑色素瘤。預計大約1.2-8.3％的GBM會攜帶這種染色體易位。編碼FGFR3和TACC3的基因位于人類染色體4p16，相距48kb，代表惡性膠質瘤中最常見的FGFR-TACC染色體重排。FGFR-TACC融合是有效的癌基因，具有促生長作用并誘導非整倍性。但是，其細胞內信號通路尚不清楚。攜帶FGFR-TACC融合的腫瘤患者預后不良，死亡率高。目前，針對FGFR3-TACC3融合蛋白僅限于針對FGFRs的激酶抑制劑，這些小分子化合物是典型的多激酶抑制劑，靶向FGFR和其他酪氨酸激酶。因此，精確靶向FGFR3-TACC3將減少不良反應，對腫瘤的靶向治療具有重要意義。

發明內容

有鑒于此，本發明創造旨在克服現有技術中的缺陷，提出一種基于CRISPR-Cas13a系統特異性靶向F3-T3融合基因的crRNA及應用。

為達到上述目的，本發明創造的技術方案是這樣實現的：

一種基于CRISPR-Cas13a系統特異性靶向F3-T3融合基因的crRNA，其序列如SEQIDNO：1所示。

一種應用上述crRNA介導的CRISPR-Cas13a基因編輯系統。

一種上述crRNA介導的CRISPR-Cas13a基因編輯系統在抑制癌細胞增殖或殺傷腫瘤細胞中的應用。

優選的，所述crRNA介導的CRISPR-Cas13a基因編輯系統通過觸發旁效應引起RNA降解來抑制腫瘤細胞增殖或殺傷腫瘤細胞。

優選的，所述腫瘤細胞為膠質瘤細胞。

更優選的，所述膠質瘤細胞為膠質母細胞瘤細胞。

優選的，所述膠質瘤細胞為人膠質瘤細胞U87細胞或TBD0220細胞。

一種上述crRNA介導的CRISPR-Cas13a基因編輯系統在特異性靶向FGFR3-TACC3融合基因中的應用。

優選的，所述Cas13a基因在腫瘤細胞中的表達載體為慢病毒表達載體。

更優選的，所述慢病毒表達載體為p GV341。

相對于現有技術，本發明創造具有以下優勢：

(1)本發明創造所述的crRNA介導的CRISPR-Cas13a基因編輯系統具有較高的目的基因敲低效率；