[發明專利]吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110773774.8
• 申請日: 2021-07-08
• 公開（公告）號: CN113372295A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 王庭欣;鄭佳妍;陳立柱;韓曉利;李昳晴;劉崢顥;金山;趙志磊;李春花;趙昕
• 申請（專利權）人: 河北大學;北京庫爾科技有限公司
• 主分類號: C07D279/20
• 分類號: C07D279/20;C07K14/765;C07K1/107;C07K16/44;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 張莉靜

本發明提供了一種吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制備方法和應用。本發明利用重氮化法在吩噻嗪分子上引入羧基，用混合酸酐法或碳二亞胺法將修飾后的吩噻嗪與載體蛋白偶聯，制備完全抗原，完全抗原結構式如式Ⅱ所示。本發明對合成的吩噻嗪完全抗原進行了鑒定，優化了高效液相色譜法的鑒定條件。本發明制備的吩噻嗪完全抗原免疫效果好，動物免疫后獲得的抗血清經間接酶聯免疫測定抗體效價可達1:3000，本發明制備方法簡單，成本低，適宜大規模推廣應用。

技術領域

本發明涉及抗原制備技術領域，具體地說是一種吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制備方法和應用。

背景技術

吩噻嗪藥物在人體內消除速率較慢，容易在體內產生藥物殘留，特別是食用動物中殘留的吩噻嗪類鎮定劑經食物鏈進入人體后，可對人體的內分泌、運動和循環等系統以及肝臟器官造成不良影響，引起白細胞減少、肝功能障礙、粒細胞缺乏癥、接觸性皮炎和皮疹等毒副作用，給人體健康帶來很大風險。檢測動物源性食品中吩噻嗪殘留常用儀器分析方法，免疫學檢測方法應用較少，但相比于儀器分析方法，免疫學檢測方法成本較低，檢測時間短，適用于大批量樣品現場檢測。完全抗原作為免疫學檢測方法的基礎至關重要。為充實針對食品中吩噻嗪殘留的免疫學檢測方法，本發明成功制備吩噻嗪完全抗原，為之后建立相關的免疫學檢測方法做基礎。

由于吩噻嗪本身結構的特殊性，導致吩噻嗪合成抗原困難加重，現有的針對吩噻嗪合成抗原的方法大多操作復雜，制備過程費時費力，且充滿危險性。為簡化制備過程，降低危險性，本發明重新研究設計吩噻嗪合成完全抗原的合成路線，并設計此吩噻嗪完全抗原鑒定方法，以確保此完全抗原合成成功。

發明內容

本發明的目的就是提供一種吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制備方法和應用，以為吩噻嗪的免疫學檢測提供一種完全抗原。

本發明的目的是這樣實現的：一種吩噻嗪半抗原，其分子結構式如式Ⅰ所示：

上述的吩噻嗪半抗原的制備方法，包括以下步驟：

(a)在2-6℃條件下，用HCL溶液調節對氨基苯甲酸溶液pH值至1-3，漩渦攪拌至溶液完全溶解；

(b)將所得酸性的對氨基苯甲酸溶液與亞硝酸鈉溶液混合，得到淺黃色溶液，并于2-6℃冷藏20-40min；其中，對氨基苯甲酸與亞硝酸鈉的摩爾比為1∶2-3；

(c)在步驟(b)所得溶液中加入吩噻嗪，其中，吩噻嗪與對氨基苯甲酸的摩爾比為1∶1，然后在暗室中磁力攪拌10-14h，即得所述吩噻嗪半抗原。

一種吩噻嗪完全抗原，其是由上述的吩噻嗪半抗原與載體蛋白Protein制備而成，其分子結構式如式Ⅱ所示：

上述的吩噻嗪完全抗原的制備方法，其通過混合酸酐法制備而成：

(a)在冰浴環境下，在吩噻嗪半抗原溶液中加入1，4-二氧六環和N-N-二甲基甲酰胺，震蕩混合1-3min，靜置5-15min后，加入三乙胺，再靜置5-15min后加入氯甲酸異丁酯，然后移除冰浴，磁力攪拌20-40min；其中，吩噻嗪半抗原∶1，4-二氧六環∶N-N-二甲基甲酰胺∶三乙胺∶氯甲酸異丁酯＝0.1mmoL∶1-2mL∶1-2mL∶0.1-0.3nmoL∶0.1-0.2nmoL；

(b)取載體蛋白-硼酸鈉溶液與步驟(a)所得反應液混合，其中，載體蛋白-硼酸鈉：吩噻嗪半抗原＝12mg∶0.1mmoL，然后于2-6℃下反應10-14h，裝入透析袋，在PBS緩沖液中透析60-80h，每隔4-8h換透析液，透析完成后即得所述吩噻嗪完全抗原。

上述的吩噻嗪完全抗原的制備方法，其通過碳二亞胺法制備而成：