[發明專利]一種使用生物反應器培養石斑魚細胞的方法

有效

• 申請號: 202110769430.X
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113444686B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 尹順義;袁春燕;伍活鐮;蔣東陽;任政華
• 申請（專利權）人: 廣州齊志生物工程設備有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 凌日紅

1.一種使用生物反應器培養石斑魚細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）取石斑魚GS細胞使用0.2~0.3%胰酶消化液進行消化處理，制備為細胞懸液；

2）將步驟1）制備的細胞懸液接種至含有細胞生長液和微載體的BC-7L的生物反應器中進行動態培養；

3）連續培養3~6天至細胞長成致密單層；

所述步驟2）中細胞生長液的加入量為1000mL，其中1000mL細胞生長液中包括800mL基礎培養基，50mL半乳糖，150mL石斑魚組織液；或所述步驟2）中細胞生長液的加入量為900mL，其中900mL細胞生長液中包括738mL基礎培養基，72mL半乳糖，90mL石斑魚組織液；

所述基礎培養基為DMEM基礎培養基，所述石斑魚組織液的制備過程為：石斑魚組織10g加入100mL生理鹽水，研磨攪拌，10000rpm離心后的上清液，除菌過濾，即得；

所述步驟2）中的微載體為Cytodex 1，Cytodex 1參數：密度1.03g/mL,表面積4400cm²/g干重，加入量為2~4g/L。

2.根據權利要求1所述的使用生物反應器培養石斑魚GS細胞的方法，其特征在于，所述步驟1）中胰酶消化液，以質量分數計，包括0.01~0.03%的乙二胺四乙酸和0.25%Trypsin。

3.根據權利要求1所述的使用生物反應器培養石斑魚GS細胞的方法，其特征在于，所述步驟2）中細胞接種密度為2.5~3.9×10⁵cells/mL。

4.根據權利要求1所述的使用生物反應器培養石斑魚GS細胞的方法，其特征在于，所述步驟）2中進行動態培養時，生物反應器的參數設置如下：進氣為含2%~3%CO₂的無菌空氣，溶氧40%~50%，pH7.1~7.3，溫度22~28℃，轉速40~60rpm。