[發(fā)明專利]高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測唾液中睪酮的方法及試劑盒

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• 申請日: 2021-07-05
• 公開（公告）號: CN113341027A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設計）人: 蔡俊;賈鵬飛
• 申請（專利權）人: 艾可泰科生物科技（江蘇）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了試劑盒a.流動相：流動相A：體積比為0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈，色譜純；b.標準品母液：睪酮的乙腈溶液；c.內標液：d3?睪酮的乙腈溶液；d.稀釋液：稀釋液一：空白唾液基質溶液，3g牛血清白蛋白用水溶解定容至1L制得；稀釋液二：乙腈。高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測唾液中睪酮的方法：S1、采用高效液相色譜串聯(lián)質譜技術檢測經過上述試劑盒前處理的唾液中睪酮，利用高效液相色譜將睪酮與干擾物分離；S2、利用同位素內標法定量，以標準品與內標物的濃度比為X軸，標準品與內標物峰面積比為Y軸，建立標準曲線。本發(fā)明檢測唾液中睪酮，特異性強，靈敏度高，前處理過程較簡單，精密度和加標回收率都符合要求。

技術領域

本發(fā)明涉及檢測技術領域，尤其涉及高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測唾液中睪酮的方法及試劑盒。

背景技術

睪酮，又稱睪丸酮、睪甾酮等，是一種主要有男性睪丸或女性卵巢分泌的類固醇激素，具有維持肌肉強度及質量、維持骨質密度及強度、提神及提升體能等作用。人體合成的睪酮通過彌散進入血液循環(huán)，98％在血漿中與白蛋白和性激素結合球蛋白結合，游離睪酮只占總睪酮含量的2％。只有游離睪酮能進入靶細胞，是發(fā)揮生理效能的活性部分。血液中的部分游離睪酮通過唾液腺上皮細胞被動擴散至唾液中，因此唾液中睪酮含量被認為可以用于評估人體中游離睪酮的水平。然而唾液中的類固醇含量只占血液類固醇總含量的1-10％，因此要檢測唾液中如此低含量的睪酮，意味著相應的檢測方法需要具有高靈敏度和高特異性。

通常，檢測唾液中的類固醇含量一般使用免疫法，但免疫法在分析小分子化合物時，很容易受內源性結構類似物的干擾而導致交叉反應使得檢測結果發(fā)生難以預料的偏離。近年來，高效液相色譜串聯(lián)質譜法(LC-MS)在臨床診斷領域的普及，這種技術具有的高靈敏度和高特異性等優(yōu)點得到了廣泛的認可。本專利利用柱前衍生化結合LC-MS技術開發(fā)出一種樣本前處理簡單，靈敏度高，可靠性好的方法用于檢測人唾液中睪酮的方法和檢測試劑盒。

為此，我們提出高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測唾液中睪酮的方法及試劑盒來解決上述問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術中的問題，而提出的高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測唾液中睪酮的方法及試劑盒。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術方案：

試劑盒，包括如下試劑：

a.流動相：

流動相A：體積比為0.1％甲酸水溶液

流動相B：乙腈，色譜純；

b.標準品母液：睪酮的乙腈溶液；

c.內標液：d3-睪酮的乙腈溶液；

d.稀釋液：

稀釋液一：空白唾液基質溶液，3g牛血清白蛋白用水溶解定容至1L制得；

稀釋液二：乙腈；

e.萃取液：甲基叔丁基醚；

f.質控品：睪酮的空白唾液基質溶液，分低QC-L、中QC-M、高QC-H濃度，濃度分別為：3pg/ml、30pg/ml、80pg/ml；

g.復溶溶劑：體積比為70％乙腈水溶液。

優(yōu)選的，標準品母液配制方法如下：精確稱取10mg睪酮標準品，用乙腈溶解定容至10ml，得到1mg/ml標準品母液。

優(yōu)選的，內標液配制方法如下：精確稱取10mg d3-睪酮標準品，用乙腈溶解定容至10ml，得到1mg/ml內標母液。

優(yōu)選的，取10μl睪酮標準品母液，用稀釋2定容至10ml，得1μg/ml的睪酮標準溶液；