[發明專利]高效液相色譜串聯質譜檢測唾液中睪酮的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110757066.5
• 申請日: 2021-07-05
• 公開（公告）號: CN113341027A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 蔡俊;賈鵬飛
• 申請（專利權）人: 艾可泰科生物科技（江蘇）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.試劑盒，包括如下試劑，其特征在于：

a.流動相：

流動相A：體積比為0.1％甲酸水溶液；

流動相B：乙腈，色譜純；

b.標準品母液：睪酮的乙腈溶液；

c.內標液：d3-睪酮的乙腈溶液；

d.稀釋液：

稀釋液一：空白唾液基質溶液，3g牛血清白蛋白用水溶解定容至1L制得；

稀釋液二：乙腈；

e.萃取液：甲基叔丁基醚；

f.質控品：睪酮的空白唾液基質溶液，分低QC-L、中QC-M、高QC-H濃度，濃度分別為：3pg/ml、30pg/ml、80pg/ml；

g.復溶溶劑：體積比為70％乙腈水溶液。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，標準品母液配制方法如下：精確稱取10mg睪酮標準品，用乙腈溶解定容至10ml，得到1mg/ml標準品母液。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，內標液配制方法如下：精確稱取10mgd3-睪酮標準品，用乙腈溶解定容至10ml，得到1mg/ml內標母液。

4.根據權利要求1或3所述的試劑盒，其特征在于：

取10μl睪酮標準品母液，用稀釋2定容至10ml，得1μg/ml的睪酮標準溶液；

取10μl 1μg/ml的睪酮標準溶液，用稀釋液二定容至10ml，得1ng/ml的睪酮標準溶液；

QC-L：取3μl 1ng/ml的睪酮標準溶液，用稀釋液一定容至10ml；

QC-M：取30μl 1ng/ml的睪酮標準溶液，用稀釋液一定容至10ml；

QC-H：取80μl 1ng/ml的睪酮標準溶液，用稀釋液一定容至10ml。

5.高效液相色譜串聯質譜檢測唾液中睪酮的方法，其特征在于：

S1、采用高效液相色譜串聯質譜技術檢測經過上述試劑盒前處理的唾液中睪酮，利用高效液相色譜將睪酮與干擾物分離；

S2、利用同位素內標法定量，以標準品與內標物的濃度比為X軸，標準品與內標物峰面積比為Y軸，建立標準曲線；

S3、計算待測樣本中睪酮的含量。

6.根據權利要求5所述的高效液相色譜串聯質譜檢測唾液中睪酮的方法，其特征在于，高效液相色譜的條件為：

流動相A：體積比為0.1％的甲酸水；

流動相B：乙腈，純度為色譜純；濃度為100％；

色譜柱型號：Waters XBridge BEH C18，3.5μm,2.1mm*150mm；

采用梯度洗脫方式，見表1；

流速為0.2ml/min，柱溫為40℃，進樣體積為10μl。

表1 流動相梯度洗脫參數

7.根據權利要求5所述的高效液相色譜串聯質譜檢測唾液中睪酮的方法，其特征在于，質譜條件：

在電噴霧電離正離子檢測模式下，采用多反應監測(MRM)的質譜掃描模式；

噴霧電壓為5500V；碰撞氣為8；氣簾氣為20psi；

離子源溫度為650℃；離子源氣流GS1為70psi；GS2為50psi；

目標物睪酮m/z 318.1→126.1，同位素內標d3-睪酮m/z 321.1→126.1；

睪酮及內標的去簇電壓(DP)、射入電壓(EP)、碰撞電壓(CE)、碰撞室射出電壓(CXP)參數見表2。

表2 睪酮及內標的質譜參數