[發明專利]一種HPLC-UV法同時測定牛奶中多種殘留物的方法

有效

• 申請號: 202110753015.5
• 申請日: 2021-07-02
• 公開（公告）號: CN113759033B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 呂世明;陳海榮;譚艾娟;艾仁麗
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/04;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 蘭艷文

本發明公開了一種HPLC?UV法同時測定牛奶中多種殘留抗菌藥物的方法，包括以下步驟：（1）準確量取1?mL牛奶于塑料離心管中，沿管壁輕輕加入0.5?mL?10%三氯乙酸水溶液，旋渦混合，離心，吸取上清液于螺口刻度試管中；（2）加入200?mg/mL三氯乙酸水溶液和7%甲醛水溶液，漩渦混勻30?s，加蓋擰緊后置于90℃恒溫水浴中加熱；取出冷卻至室溫，用20%乙腈水溶液定至2?mL，混勻后，經0.22μm微孔濾頭過濾；（3）使用高效液相色譜系統進行分析。本發明通過液?液萃取技術結合色譜儀器直接用于牛奶中的抗菌藥物殘留檢測，前處理方法簡單、分析速度快、普及性強，為牛奶中的抗菌藥物殘留檢測提供了新方法、新手段和新途徑。

技術領域

本發明屬于食品檢測領域，具體地是牛奶中5種殘留抗菌藥物分析方法的構建，即牛奶中環丙沙星(CIP)、恩諾沙星(ERFX)、阿莫西林(AMX)、氨芐西林(AMP)和強力霉素(DC)的殘留分析。

背景技術

環丙沙星(CIP)、恩諾沙星(ERFX)、阿莫西林(AMX)、氨芐西林(AMP)和強力霉素(DC)(農業部公告第235號，1998)作為治療奶牛疾病的常用抗菌藥物被廣泛應用于獸醫臨床，但是如果長期使用此類藥物，便會產生交叉耐藥性，不僅影響藥物的臨床療效，同時人若食用帶有殘留的食品之后，便會引起人體不良反應的發生，對人的身體產生危害。因此必須加大對這些藥物的監控和檢測，從而保障牛奶安全，消除抗菌藥物對人體健康的威脅。

目前，殘留檢測的方法主要有三類，第一類是微生物檢測法(TTC法、BSDA等)。第二類是理化檢測方法(高效液相色譜法(HPLC)、液-質聯用法(LC-MS/MS)、高效薄層色譜法(HPTLC)等)。第三類是免疫檢測法(免疫檢測器傳感法、在線免疫親和色譜法、間接競爭ELISA等)。這些方法各有優缺點，但總的來說抗菌藥物殘留檢測將按3個方向發展：(1)靈敏度高的聯用技術；(2)多殘留組分同時檢測技術；(3)現場大規模、快速篩選的免疫檢測技術。

高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法是目前進行動物源性食品中抗菌藥物殘留檢測較為常用的方法，國內外關于這2種檢測方法報道較多。對于牛奶中氟喹諾酮類(F-quinolones，FQs)、青霉素(Penicillins，PENs)和四環素類(Tetracycline?antibiotics，TCs)抗菌藥物的檢測的報道主要是高效液相色譜法和液相-質譜聯用法。牛奶中FQs和PENs抗菌藥物多殘留檢測主要采用高效液相色譜熒光檢測法和液相-質譜聯用法。國外、國內關于水產品、雞組織中FQs多組分殘留的檢測報道很多，牛奶中的FQs多組分殘留相關報道較少，張俊升等報道了牛奶中恩諾沙星、環丙沙星的高效液相法殘留檢測。廖潔丹等報道了環丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星和二氟沙星在牛奶中的檢測，國家標準方法則可以檢測牛奶中11種FQs藥物(GB/T22985-2008)。

PENs沒有特定的紫外吸收需要經過衍生化，導致國內關于PENs藥物殘留分析的報道不多，但是國外相關的報道較多。目前檢測PENs常用的是液相-質譜聯用法，我國出入境檢驗檢疫行業標準可以檢測到動物源食品中的14種β-內酰胺類抗菌藥物(SN/T2050-2008)，國家標準方法則可以檢測到牛奶及奶粉中的9種β-內酰胺類抗菌藥物(GB/T?22975-2008)。

用于檢測TCs抗菌藥物殘留的方法很多，使用高效液相色譜法的檢測手段居多，可使用紫外/可見光吸收分光光度檢測器和熒光檢測器等，還可用液相-質譜聯用法。但由于TCs抗菌藥物的色譜性較差，因此用高效液相熒光檢測法的分析報道并不多。而TCs抗菌藥物有很好的紫外吸收值，摩爾吸收系數較大，因此TCs抗菌藥物一般采用高效液相紫外檢測法。目前國內外報道較多是液相-質譜聯用法，如岳振峰等報道了高效液相色譜串聯質譜法測定牛奶中TCs抗菌藥物及其代謝產物。檢測TCs抗菌藥物的研究方法很多，但是我國檢測牛奶中的TCs抗菌藥物的標準方法是高效液相色譜紫外檢測法(GB/T?22990-2008)，因此檢測此類藥物用國家標準方法即可。