[發(fā)明專(zhuān)利]針對(duì)新冠病毒SARS-CoV-2的單克隆抗體F5

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110745540.2
• 申請(qǐng)日: 2020-06-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113278068A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董航;董金華;單喜軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東寬和正生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/10
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 山東濟(jì)南齊魯科技專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 37108
• 代理人: 張娟

本發(fā)明公開(kāi)了一種噬菌體展示抗體庫(kù)并篩選到了五株能夠跟新冠病毒SARS?CoV?2的S蛋白結(jié)合的抗體，本發(fā)明基于合成生物學(xué)與噬菌體展示技術(shù)，將突變導(dǎo)入抗體可變區(qū)的超可變區(qū)，并將此基因轉(zhuǎn)至大腸桿菌中，從而構(gòu)建了含有10⁸種抗體的合成抗體庫(kù)；本發(fā)明的噬菌體展示抗體庫(kù)能夠篩選獲得具有特異性和檢測(cè)功能的抗體，擴(kuò)大了生物研究和醫(yī)學(xué)診斷的有力資源；本發(fā)明還篩選到了五株能夠跟新冠病毒的S蛋白結(jié)合的抗體，可以用于病毒的檢測(cè)，部分抗體可以阻斷病毒與細(xì)胞結(jié)合，具有中和新冠病毒傳染力的能力，可用于制備新冠病毒檢測(cè)產(chǎn)品、制備抑制新冠病毒藥物和制備預(yù)防或治療由新冠病毒引起的疾病的藥物制劑，具有廣泛的應(yīng)用前景。

本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)?02010499744.8，發(fā)明名稱(chēng)：噬菌體展示抗體庫(kù)及基于其淘篩獲得的針對(duì)新冠病毒SARS-CoV-2的單克隆抗體的分案申請(qǐng)，母案的申請(qǐng)日為2020年06月04日。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)是一種噬菌體展示抗體庫(kù)及基于噬菌體展示抗體庫(kù)淘篩獲得的針對(duì)新冠病毒SARS-CoV-2的單克隆抗體。

背景技術(shù)

SARS-CoV-2相比原有的冠狀病毒相比，不僅是重癥患者具有傳播性，癥狀輕微甚至潛伏期患者的傳染性也很強(qiáng)，并且傳播的途徑很多，經(jīng)飛沫、接觸均能傳播，給預(yù)防帶來(lái)了很大的困難。

各國(guó)針對(duì)新冠肺炎的治療提出了多種治療方案，主要有使用小分子藥物瑞德西韋、氯喹與羥氯喹聯(lián)用、洛匹那韋與利托那韋聯(lián)用及洛匹那韋、利托那韋與干擾素的三藥聯(lián)用，很遺憾的是都并沒(méi)有明顯的治療效果且有些存在嚴(yán)重的毒副作用。另一方面，抗體藥物在傳染病、自身免疫疾病及腫瘤等的治療上發(fā)揮了重要作用。在當(dāng)前面臨的SARS-CoV-2變異率高、新冠肺炎疫苗開(kāi)發(fā)困難且時(shí)期漫長(zhǎng)、傳統(tǒng)藥物副作用大甚至沒(méi)有效果的情況下，使用康復(fù)患者的血清治療重癥患者為一個(gè)相對(duì)有效的治療方案，在實(shí)際治療中起了一定的作用，這表明新冠病毒的抗體能夠有效的減弱SARS-CoV-2病毒的傳染能力，在新冠肺炎患者治療中起了一定的作用，給醫(yī)藥研發(fā)人員指出了一條新的道路。

SARS-CoV-2病毒直徑為75-160納米，其基因組為連續(xù)線性單鏈RNA，其基因組依次編碼核蛋白(nucleoprotein)、包膜蛋白(envelope protein)、膜蛋白(membrane protein)及棘突蛋白(spike protein，又稱(chēng)S-protein或S蛋白)，其中棘突蛋白是其表面最重要的蛋白，其主要功能為決定病毒的宿主范圍和特異性，與宿主細(xì)胞細(xì)胞膜受體結(jié)合并融合，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的感染。棘突蛋白具有兩個(gè)亞基S1和S2，S1中的受體結(jié)合區(qū)(receptor bindingdomain，RBD)，與人類(lèi)SARS-CoV受體血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II(ACE2)分子互作，而S2則含有膜融合過(guò)程所需要的基本元件，實(shí)現(xiàn)病毒與細(xì)胞的融合。因此S蛋白的人源單克隆抗體理論上可以阻斷病毒跟細(xì)胞的結(jié)合，具有減弱病毒傳染的能力，可以作為抗體藥物用于治療新冠病毒肺炎患者。

抗體是哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)中的一個(gè)重要糖蛋白分子。抗體分子由兩條重鏈(Heavychain)和兩條輕鏈(Light chain)組成，其中重鏈由分為可變區(qū)(Variable region ofheavy chain，VH)和三個(gè)恒定區(qū)(Constant region of heavy chain；CH1，CH2，CH3)，輕鏈則由一個(gè)可變區(qū)(VL)和一個(gè)恒定區(qū)(CL)組成。可變區(qū)具有跟抗原結(jié)合的功能，因抗體個(gè)體不同而不同，而抗體的恒定區(qū)則因抗體的種屬及亞型不同而不同。抗體的可變區(qū)又分為4個(gè)框架區(qū)(Framework；FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3，F(xiàn)R4)和三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(Complementarity-determiningregions；CDR1，CDR2，CDR3)，其中抗體重鏈可變區(qū)的結(jié)構(gòu)為HFR1-CDRH1-HFR2-CDRH2-HFR3-CDRH3-HFR4，抗體輕鏈可變區(qū)的結(jié)構(gòu)為L(zhǎng)FR1-CDRL1-LFR2-CDRL2-LFR3-CDRL3-LFR4，其中互補(bǔ)決定區(qū)又稱(chēng)為高可變區(qū)，直接與抗原的表位結(jié)合。

發(fā)明內(nèi)容