[發明專利]α-葡萄糖苷酶抑制劑體內評價方法

在審

• 申請號: 202110731429.8
• 申請日: 2021-06-29
• 公開（公告）號: CN113295636A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 劉細霞;吳琴;侯建軍;陳思銳;曹佩;豐云;劉世昕
• 申請（專利權）人: 湖北師范大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/50
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 陳鴻偉

本發明涉及一種α?葡萄糖苷酶抑制劑體內評價方法，包括下列步驟：飼養斑馬魚直至狀態穩定；將所述斑馬魚投入3％葡萄糖水中養殖2～6天，確定得高血糖斑馬魚模型；在所述3％葡萄糖水中再加入楊梅苷，飼養所述高血糖斑馬魚模型若干天后，測定所述高糖斑馬魚模型的腸道樣品中α?葡萄糖苷酶的酶活力。本發明提供的α?葡萄糖苷酶抑制劑體內評價方法可通過人工飼養的高糖斑馬魚模型進行，高糖斑馬魚模型構建效率高，能夠節省時間成本和經濟成本，也能夠成功評價a?葡萄糖苷酶抑制劑類降血糖物質的體內降血糖活性，以及用于評價a?葡萄糖苷酶抑制劑在體內降低腸道酶活力的性能，操作方便難度低。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，特別是涉及一種α-葡萄糖苷酶抑制劑體內評價方法。

背景技術

據國際糖尿病聯盟2019年發布的最新數據顯示，2019年全球糖尿病患者人數約4.63億，預計糖尿病患者人數還會逐年攀升。其中我國糖尿病患者人數在世界各國中位居榜首，2型糖尿病患者人數約占我國總糖尿病患者人數的90％。α-葡萄糖苷酶抑制劑是通過抑制小腸黏膜刷狀緣的α-葡萄糖苷酶以延緩碳水化合物的吸收，降低餐后高血糖，可以用于治療部分2型糖尿病患者。

發掘植物源的α-葡萄糖苷酶抑制劑需經過體外和體內評價，體外評價方法十分成熟，而現有體內評價方法95％以上均采用小鼠動物模型，該模型周期長，養殖成本高和養殖場所要求苛刻，十分不利于α-葡萄糖苷酶抑制劑的體內評價。

斑馬魚屬于輻鰭亞綱鯉科短擔尼魚屬，其基因與人類基因同源性高達87％。其胰腺的結構和功能以及參與血糖調節的相關組織器官與哺乳動物相似度高，具有一定的保守性。其繁殖速度快、個體小、可活體觀察組織等優點使其作為模式生物在糖尿病研究中得到了應用。

現有技術中，如一種II型糖尿病斑馬魚模型的構建方法及應用，申請號CN201911005040.4，雖然提供了一種斑馬魚模型，但構建轉基因斑馬魚，部分實驗室由于實驗條件限制無法實現，普適性不太高。構建過程較復雜，存在一定的風險。另外，采用藥物對轉基因斑馬魚進行造模，藥物的使用量對模型構建成功是否會產生影響并未進行相關說明。再者，含有硝基基團的化合物具有一定的誘變性和遺傳毒性，在造模過程中除了發揮誘導殺死胰腺組織細胞的作用外，可能對斑馬魚機體產生其它毒害。

發明內容

基于此，有必要針對上述提到的至少一個問題，提供一種α-葡萄糖苷酶抑制劑體內評價方法。

本發明申請提供的α-葡萄糖苷酶抑制劑體內評價方法，包括下列步驟：

飼養斑馬魚直至狀態穩定；

將所述斑馬魚投入3％葡萄糖水中養殖2～6天，確定得高血糖斑馬魚模型；

在所述3％葡萄糖水中再加入楊梅苷，飼養所述高血糖斑馬魚模型若干天后，測定所述高糖斑馬魚模型的腸道樣品中α-葡萄糖苷酶的酶活力。

在其中一個實施例中，所述飼養斑馬魚直至狀態穩定的步驟，包括：

將斑馬魚放入水溫為25℃～27℃的清水中，斷食24小時；

向所述斑馬魚投喂豐年蟲，每隔三天更換清水一次，每天對所述斑馬魚光照14小時；

檢測到斑馬魚在兩周內的死亡率小于或等于5％，確定所述斑馬魚為狀態穩定。

在其中一個實施例中，所述將所述斑馬魚投入3％葡萄糖水中養殖2～6天的步驟，包括：

每天定時定量向所述斑馬魚投放過量食物；

間隔48小時更換2/3的3％葡萄糖水；

所述3％葡萄糖水的水溫維持在25～27℃，控制所述斑馬魚的晝夜時長分別為14h和10h。

在其中一個實施例中，所述測定所述高糖斑馬魚模型的腸道樣品中α-葡萄糖苷酶的酶活力的步驟，包括：