[發明專利]一種祁術成熟胚高效離體再生體系建立的方法

有效

• 申請號: 202110706121.8
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113383707B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 侯金艷;吳麗芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 丁瑞瑞

本發明公開一種祁術成熟胚高效離體再生體系建立的方法，包括以下步驟：種子的選取與預處理，將低溫等離子體活化水應用到預處理過程中；將預處理后的成熟胚，接種于不定芽誘導培養基中，進行不定芽的誘導培養；將誘導出不定芽的成熟胚轉接于增殖培養基中進行不定芽的增殖培養；將增殖的不定芽叢切成適宜大小的切塊，轉接于伸長培養基中進行不定芽的伸長培養；待不定芽長至2～3cm并伴有完整葉片時，轉入生根培養基中進行生根培養，最終獲得完整的祁術再生植株。本發明將低溫等離子體活化水應用到預處理過程中，然后通過直接誘導叢生芽再生來實現對祁術種苗的快速繁殖，為祁術種苗的高效繁育及規模化生產提供了有力的技術保證。

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種祁術成熟胚高效離體再生體系建立的方法。

背景技術

祁術為菊科蒼術屬多年生宿根藥用植物，因產于祁門而得名，其根莖可入藥，是祁門最具代表性的中藥材之一，也為安徽道地名貴藥材。大量中醫臨床研究表明，祁術性溫、味甘，微苦，除具有一般白術健脾益氣、燥濕利水、養神、安胎、消除疲勞等功效外，對黃疸病、心臟病、胃潰瘍及腹水病具有顯著的治療效果。除了具有名貴藥材屬性以外，祁術還可作補品直接食用，經與炒過的芝麻或黃豆、糯米等混合碾粉，可制成“祁術糕”，久病者食用能較快康復，無病者食用則能延年益壽。基于其療效顯著且藥效持久，補而不膩，祁術被世人用作珍貴藥材補品。此外，祁術還廣泛用于美容護膚等行業，具有廣闊的市場應用前景。

由于祁術對生長環境的要求較高，性喜涼爽，忌高溫、積水，其生長區域僅局限于黃山海拔1000m以上且土質肥沃的背陰山坡、溝谷林地及灌木叢。此外，由于祁術生長緩慢，開花結種較少，部分種子不具備活力，且隨著民間采挖量日增，祁術的生態環境嚴遭破壞，導致在自然生態環境中野生祁術分布極其稀少。目前，在生產上，祁術通常采用傳統的播種方式進行繁殖，但存在種子萌發率低，種苗抵抗力弱，容易受到立枯病和根腐病等多種病蟲害的危害等問題。此外，通過利用根莖對祁術進行繁殖也是可行的，但由于根莖作為祁術藥用的主要部位，通過此種方式進行繁殖存在成本高、繁殖速度慢、繁殖受材料限制，且易引入病害等問題。目前，利用組織培養技術對祁術進行繁殖的研究已有報道，但繁殖過程存在消毒不徹底，繁殖系數低等問題，嚴重限制了祁術種苗的規模化生產與推廣應用。針對祁術繁育現有技術所存在諸多問題，急需開發一種祁術成熟胚高效離體再生體系建立的方法，以滿足對祁術種苗的快速繁殖和品種改良的需求。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于如何滿足對祁術種苗的快速繁殖和品種改良的需求。

本發明通過以下技術手段實現解決上述技術問題的：一種祁術成熟胚高效離體再生體系建立的方法，包括以下步驟：

(1)種子的選取與預處理，將選取的種子用過濾滅菌的低溫等離子體活化水浸泡2～4min，然后用無菌濾紙吸干種子表面水分，備用；

(2)將預處理后的成熟胚，接種于不定芽誘導培養基中，進行不定芽的誘導培養；

(3)將誘導出不定芽的成熟胚轉接于增殖培養基中進行不定芽的增殖培養；

(4)將增殖的不定芽叢切成適宜大小的切塊，轉接于伸長培養基中進行不定芽的伸長培養；

(5)待不定芽長至2～3cm并伴有完整葉片時，轉入生根培養基中進行生根培養，最終獲得完整的祁術再生植株。

本發明將低溫等離子活化水應用到祁術種子的預處理過程中，在降低污染率的同時，加快成熟胚再生的啟動，通過直接誘導叢生芽再生來實現對祁術種苗的快速繁殖。

優選地，所述步驟(1)種子的選取與預處理是指選取有活力的成熟飽滿的祁術種子，將其置于250ml塑料培養瓶中，于流水下沖洗10～20min。然后將種子置于無菌操作臺中，用無菌水沖洗3～4遍后，用75％無水乙醇進行2次表面消毒，每次消毒15～20s，2次之間用無菌水沖洗2～3遍；然后用0.1％(w/v)的升汞溶液消毒3～5min，之后用無菌水沖洗6～8遍。