[發明專利]一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 202110693022.0 | 申請日： | 2021-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN113136378B | 公開（公告）日： | 2021-09-03 |
| 發明（設計）人： | 黃佳俊;李慧靈;胡浩軒;林育成;盧宇靖;周金林 | 申請（專利權）人： | 廣東金駿康生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/24 | 分類號： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/10;C12N15/70;C12P19/60;C12R1/19 |
| 代理公司： | 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 李曉陽 |
| 地址： | 528000 廣東省佛山市南海區獅山鎮*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 糖苷酶 tperha 突變體 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體，其特征在于，為突變體TpeRha-R369A、突變體TpeRha-W512A 和突變體TpeRha-K579A中的任一種；
所述突變體TpeRha-R369A，為將氨基酸序列為如SEQ ID NO：1所示的TpeRha酶的第369位的精氨酸突變為丙氨酸；
所述突變體TpeRha-W512A，為將氨基酸序列為如SEQ ID NO：1所示的TpeRha酶的第512位的色氨酸突變為丙氨酸；
所述突變體TpeRha-K579A，為將氨基酸序列為如SEQ ID NO：1所示的TpeRha酶的第579位的賴氨酸突變為丙氨酸。
2.根據權利要求1所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體，其特征在于，所述突變體TpeRha-R369A的氨基酸序列為如SEQ ID NO：3所示；
所述突變體TpeRha-W512A的氨基酸序列為如SEQ ID NO：5所示；
所述突變體TpeRha-K579A的氨基酸序列為如SEQ ID NO：7所示。
3.根據權利要求2所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體，其特征在于，編碼所述突變體TpeRha-R369A基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO：4所示；
編碼所述突變體TpeRha-W512A基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO：6所示；
編碼所述突變體TpeRha-K579A基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO：8所示。
4.根據權利要求1所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體，其特征在于，所述TpeRha酶來源于石油熱袍菌DSM 13995。
5.一種權利要求1-4任一項所述的鼠李糖苷酶TpeRha突變體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1，將TpeRha酶基因連接到質粒中，得到重組質粒；
S2，設計突變引物，采用突變引物并以所述重組質粒為模板進行PCR擴增，酶切消化去除模板DNA，得到突變產物；
S3，將突變產物轉化至宿主細胞中，篩選得到鼠李糖苷酶TpeRha突變體表達菌株，誘導表達，得到鼠李糖苷酶TpeRha突變體。
6.根據權利要求5所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體的制備方法，其特征在于，所述TpeRha酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
7.根據權利要求5所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體的制備方法，其特征在于，突變引物序列如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：23所示。
8.根據權利要求5所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體的制備方法，其特征在于，所述宿主細胞為大腸桿菌。
9.權利要求1-4任一項所述的一種鼠李糖苷酶TpeRha突變體在制備淫羊藿次苷Ⅰ組合物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，利用鼠李糖苷酶TpeRha突變體催化轉化淫羊藿總黃酮中的多組分黃酮糖苷制備淫羊藿次苷Ⅰ組合物。
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