[發明專利]一種煙葉處理復合生物制劑及鮮煙葉的處理方法

有效

• 申請號: 202110687891.2
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113475745B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 馮穎杰;楊宗燦;楊永鋒;張婷婷;張展;劉文召;彭玉富;劉向真;趙森森;牛洋洋
• 申請（專利權）人: 河南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A24B15/20
• 代理公司: 北京維澳專利代理有限公司 11252
• 代理人: 曾晨

1.一種鮮煙葉的處理方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟(1)：將保藏編號為CGMCC NO.21313的微球菌(Micrococcaceae Pribram)ZY02的菌落接種至液體培養基中，于25-40℃，100-200r/min的搖床中培養6-36h，得到微球菌種子液，將微球菌種子液在4000r/min，4℃條件下低溫離心，去除上清液，加入無菌水復溶，調節OD₆₀₀為2.0，得到微球菌種子；

步驟(2)：配制含有葡萄糖、蛋白胨、酵母粉和一水合檸檬酸的水溶液，調節pH并滅菌后，接種保藏編號為CGMCC NO.21544的葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacter sp.)ZT-01，恒溫震蕩培養一段時間，制得葡糖酸醋桿菌種子液；

步驟(3)：將煙末與去離子水按照質量比1:(2-20)混合，在30℃-100℃下提取0.5h-5h，過濾后取濾液加入可溶性淀粉和可溶性蛋白，混勻并滅菌，得到煙草發酵誘導培養基；

步驟(4)：將微球菌種子和煙草發酵誘導培養基按照體積比1:(50-1000)混合，在溫度25-40℃、50-300r/min攪拌發酵1-5d，發酵后的煙草發酵誘導培養基離心后在冰水浴中超聲破碎，然后低溫離心，取上清液，得到ZY02生物制劑；

步驟(5)：將葡糖酸醋桿菌種子液和煙草發酵誘導培養基按照體積比1:(10-1000)混合，在溫度25-40℃、50-300r/min下先攪拌發酵12-48h再靜置12-72h，發酵后的煙草發酵誘導培養基離心后在冰水浴中超聲破碎，然后低溫離心，取上清液，得到ZT-01生物制劑；

步驟(6)：將ZY02生物制劑和ZT-01生物制劑根據體積比(1-10):(1-10)混合，得到復合生物制劑；

步驟(7)：在鮮煙葉烘烤前，根據復合生物制劑與鮮煙葉的體積質量比為1:(50-10000)將復合生物制劑以噴霧的方式添加至鮮煙葉中。

2.根據權利要求1所述的鮮煙葉的處理方法，其特征在于，所述步驟(1)具體如下：

將保藏編號為CGMCC NO.21313的微球菌(Micrococcaceae Pribram)ZY02的菌落接種至液體培養基中，于30℃，150r/min的搖床中培養12h，得到微球菌種子液，將微球菌種子液在4000r/min，4℃條件下低溫離心20min，去除上清液，加入無菌水復溶，調節OD₆₀₀為2.0，得到微球菌種子。

3.根據權利要求1所述的鮮煙葉的處理方法，其特征在于，所述步驟(2)具體如下：

配制含有20g/L葡萄糖、5g/L蛋白胨、5g/L酵母粉、1g/L一水合檸檬酸的水溶液，調節pH至4.8-5，于121℃滅菌15min，接種保藏編號為CGMCC NO.21544的葡糖酸醋桿菌ZT-01后于25-40℃，100-200r/min的條件下恒溫震蕩培養12-48h，制得葡糖酸醋桿菌種子液。

4.根據權利要求1所述的鮮煙葉的處理方法，其特征在于，所述步驟(3)具體如下：

將煙末過篩，過篩后的煙末與去離子水按照質量比1:(2-20)混合，在30℃-100℃下提取0.5h-5h，過濾后取濾液按照10g/L的可溶性淀粉添加量和10g/L的可溶性蛋白添加量加入可溶性淀粉和可溶性蛋白，混勻并滅菌，得到煙草發酵誘導培養基。

5.根據權利要求1所述的鮮煙葉的處理方法，其特征在于，所述步驟(4)具體如下：

步驟(4-1)：將微球菌種子與煙草發酵誘導培養基按照體積比1:(50-1000)混合，在溫度25-40℃、50-300r/min的條件下攪拌發酵1-5d；

步驟(4-2)：發酵后的煙草發酵誘導培養基離心后在冰水浴中超聲破碎2-30min，功率為50-300W，超聲后低溫離心，取上清液，得到ZY02生物制劑。