[發明專利]豬偽狂犬病變異病毒毒株及其應用

在審

• 申請號: 202110684706.4
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113502275A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發明（設計）人: 陳義鋒;王闖;林峰;陳智韡;楊宏富;劉陽陽;劉志昌
• 申請（專利權）人: 江西正邦科技股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/38;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 戴繼翔

本申請提供了豬偽狂犬病變異病毒毒株及其應用，屬于病毒分子生物學和基因工程領域技術領域。通過在某豬場PRV病發體中分離的病毒，經PCR鑒定、測序和毒力測試，確認屬于PRV強毒，命名為PRV SD2020株，以該毒株為親本，利用基因編輯技術(CRISPR/CAS9系統)敲除其gI?gE基因和TK基因，構建了雙基因所失株PRV SD2020ΔgI?gE和三基因缺失株PRV SD2020ΔgI?gE?TK。將這兩個基因缺失株制備滅活疫苗和活疫苗，免疫攻毒保護試驗結果表明所制備的疫苗具有良好的好安全性和免疫原性，表明該兩個毒株適用于偽狂犬疾病防控和凈化。

技術領域

本申請屬于病毒分子生物學和基因工程領域技術領域，更具體地，涉及一種豬偽狂犬病變異病毒毒株及其應用。

背景技術

偽狂犬病是偽狂犬病病毒(以下簡稱PRV)引起的一種豬的以瘙癢、發熱和腦脊髓炎神經癥狀等為特征的重要傳染病，是當前危害養豬業的最為嚴重的傳染病之一，在世界范圍內廣泛流行，每年給世界養豬業造成巨大的經濟損失。由于該病毒同時可以感染多種家畜(豬、牛、綿羊、山羊、犬、兔、馬等)和野生動物(狐、狼、鼠、蝙蝠、鹿、熊、野豬等)，該病是典型的自然疫源性疾病。因為豬是其唯一的自然攜帶者，部分大豬潛伏感染長期帶毒并間歇排毒，成為豬群的傳染源。主要通過接觸傳播，可通過空氣、水和污染的媒介傳播，也可通過胎盤和精液傳播，鼠、貓、狗等野生或者家養哺乳動物也可傳播該病。該病最早報道于1902年，90年代后呈世界性分存，尤其是豬群密集的地區。Bartha-K61疫苗株的使用，曾經有效的控制了RPV的病毒的傳播，但并沒有阻斷感染。大多數歐洲國家、美國和新西蘭通過免疫凈化已經清除了飼養豬群中的經典PRV感染。

PRV屬于皰疹病毒目，皰疹病毒科，α皰疹病毒亞科，水痘-帶狀病毒屬，PRV是雙鏈DNA病毒，基因組全長約150kb，可編碼7～100個基因，毒力相關基因有TK，糖蛋白gC、gI、gE、gG等。PRV當前只有一個血清型，但不同毒株的生物學特性和毒力強弱不同，2011年以來我國東北、華東和華南新出現的PRV變異毒株，對免疫過PRV經典疫苗的豬場造成嚴重的經濟損失，表現為母豬流產、產死胎和木乃伊胎，仔豬中樞神經癥狀、呼吸困難、高死亡率，生長育肥豬呼吸道疾病，偶爾也有發生死亡，實驗室確診為PRV野毒感染，流行病學調查結果表明，PRV變異毒株毒力基因gI、gE等發生多個位點插入或突變，主要抗原基因gB、gC和gD也發生了多個位點的插入、缺失和點突變，導致中和和抗體發生突變；免疫攻毒保護試研究表明，傳統的Bartha K61株疫苗能對PRV經典毒株(如Ea株)等提供良好的免疫保護，但對流行病毒的變異株僅能提供部分保護，這與臨床上免疫過Bartha K61疫苗的豬屢屢發生RPV感染現象一致。

因此，構建以變異毒株為基礎的疫苗侯選株，通過加強免疫、區分感染和免疫策略(DIVA)，逐步建立凈化豬群，才能有效的控制PRV變異株侵襲，最終凈化PRV感染。

發明內容

本申請的目的包括，例如，提供一種豬偽狂犬病變異病毒毒株及其在制備豬偽狂犬病疫苗上的應用，以至少改善部分上述問題。

本申請的實施例可以這樣實現：

一方面，本申請實施例提供一種豬偽狂犬病變異病毒毒株，命名為PRV SD2020株，PRV SD2020毒株的gB、gC、gD、gI、gE和TK基因序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。

另一方面，以PRV SD2020毒株為基礎進行改造，使其上的gI/gE雙基因片段缺失，以構建新的豬偽狂犬病變異病毒基因工程毒株。

在一些實施例中，PRV SD2020株缺失gI/gE片段為2907bp，構建了新的豬偽狂犬病變異病毒基因工程毒株，命名為PRV SD2020ΔgI/gE株，PRV SD2020ΔgI/gE株的保藏信息如下：

保藏編號：NO:V202150