[發明專利]一種生物樣本保存液及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110679235.8
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113287603B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 田娜;張石林;龔慶;黃玉玲;鞠帥
• 申請（專利權）人: 吉林省拓華生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 李博

本發明提供了一種生物樣本保存液，屬于生物樣本保存技術領域，保存液含有肝素鈉，人參皂苷，人血白蛋白，復方電解質溶液，高糖DMEM培養基溶液，人臍帶間充質干細胞培養上清液，雙抗。本發明的保存液能夠保證組織或血細胞充足的營養供應，延長臍帶組織、毛囊組織和經血樣本的體外保存時間。本發明的保存液適用范圍廣，且能夠使生物樣本在保持高存活率和活性的情況下，滿足生物樣本長時間/長距離運輸的需求，增加了間充質干細胞的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物樣本保存技術領域，具體涉及一種生物樣本保存液及其制備方法與應用。

背景技術

間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是干細胞家族的重要成員，來源于發育早期的中胚層，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注，是一種應用廣泛的干細胞。

間充質干細胞最初在骨髓中發現，隨后還發現存在于人體發生、發育過程的許多種組織中，如骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺、臍帶、毛囊等組織。間充質干細胞從組織如臍帶中分離后，在體外培養中有較高的增殖能力和體外傳代能力，滿足臨床治療需要大量MSCs的要求。

但是MSCs的分離需在組織離開母體后短時間內進行，否則無法分離出足量的原代MSCs，導致后續MSCs培養和增殖受影響。目前通常是采用生理鹽水或細胞培養基作為保存溶液，上述保存液僅能夠在短時間內提供一定的營養物質或生存環境，長時間保存不能達到有效的保護作用，生物樣本難以長時間保持生物活性，無法分離出原代細胞。此外，保存液中含有的血清容易導致病毒等微生物引入，無形中增加了產品的安全風險。因此急需研究一種生物樣本保存液，使生物樣本在保存液中維持較長時間的生物活性，滿足長途運輸的要求。

發明內容

本發明的目的在于一種生物樣本保存液，該保存液延長了生物樣本的保存時間，保證細胞的高存活率與活性。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種生物樣本保存液，所述的保存液含有肝素鈉，人參皂苷，人血白蛋白，復方電解質溶液，高糖DMEM培養基溶液，人臍帶間充質干細胞培養上清液，雙抗。

優選地，所述肝素鈉的濃度為3～150U/mL，人參皂苷濃度為10～30mg/mL，人血白蛋白的濃度為10～20％，所述復方電解質溶液、高糖DMEM培養基溶液、人臍帶間充質干細胞培養上清液與雙抗的體積比為3～4:1～5:3～5:0.1～0.5。

優選地，所述的人臍帶間充質干細胞培養上清液來源于第5代的人臍帶間充質干細胞培養上清液。

優選地，所述人臍帶間充質干細胞培養上清液在細胞密度為1.5×10⁵～2×10⁵個/mL時收集上清液。

優選地，所述的生物樣本包括臍帶組織、經血或毛囊組織。

優選地，所述人參皂苷的制備方法包括：人參與醇溶液混合，超聲提取，離心干燥，即得。

優選地，所述醇溶液為70～80％乙醇溶液。

優選地，所述超聲的頻率為40kHZ，超聲的功率為250W，超聲時間為20min。

本發明提供了一種上述生物樣本保存液的制備方法，所述制備方法包括如下：將所述高糖DMEM培養基溶液、復方電解質溶液和肝素鈉攪拌混勻，然后加入人血白蛋白、人參皂苷、人臍帶間充質干細胞培養上清液、雙抗，攪拌混勻，即得。

本發明還提供了一種上述生物樣本保存液在制備保存生物樣本試劑中的應用。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：