[發明專利]一種高效液相色譜串聯質譜檢測全血中免疫抑制劑的檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202110673324.1
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN113533555B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 曾珊珊;張琦;韓寶玉;劉華芬
• 申請（專利權）人: 杭州凱萊譜精準醫療檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧;曹小燕

1.一種高效液相色譜串聯質譜檢測全血中免疫抑制劑的檢測試劑盒，其特征在于，含有內標液，所述內標液中含有添加劑，所述添加劑為維生素E；所述免疫抑制劑為環孢霉素A、他克莫司、西羅莫司和依維莫司中的一種或多種。

2.如權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述維生素E的濃度為0.5-1.5mg/mL。

3.如權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述內標液中還含有同位素標記的免疫抑制劑和乙腈，其中環孢霉素A的內標為同位素標記的環孢霉素A，他克莫司的內標為同位素標記的他克莫司，西羅莫司和依維莫司的內標都為同位素標記的西羅莫司；所述內標液以乙腈為溶劑。

4.如權利要求1-3任一項所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還含有內標稀釋液，所述內標稀釋液包括七水合硫酸鋅、純化水和甲醇；所述內標稀釋液中，純化水和甲醇的體積比為3:7，七水合硫酸鋅的含量為60mM；所述內標液和內標稀釋液的體積比為1：24。

5.如權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括系統適用性溶液，所述系統適用性溶液包含環孢霉素A、他克莫司、西羅莫司、依維莫司中的一種或多種，以及同位素標記的環孢霉素A、他克莫司和西羅莫司中的一種或多種，還包含溶劑和添加劑，所述溶劑為含添加劑的乙腈，所述添加劑為維生素E。

6.如權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括標準樣品、質控樣品和液相色譜流動相；所述標準樣品和質控樣品采用含基質添加劑的無菌牛血作為基質配制；所述基質添加劑中含有維生素E；所述標準樣品為含有標準濃度的環孢霉素A、他克莫司、西羅莫司、依維莫司中的任意一種或多種的樣品；所述質控樣品為含有低中高三個不同水平濃度的樣品；所述液相色譜流動相包括流動相A和流動相B，流動相A為2mM乙酸銨-0.1%甲酸水溶液，流動相B為2mM乙酸銨-0.1%甲酸甲醇溶液。

7.一種檢測全血中的免疫抑制劑的方法，其特征在于，采用如權利要求1-6任一項所述的檢測試劑盒進行檢測；包括系統適用性測試、樣品制備、樣品前處理和樣品檢測；其中，所述樣品前處理包括以下步驟：取內標液和內標稀釋液以體積比1：24的比例混勻，得到內標工作液；取樣品與內標工作液按照體積比1∶3~1∶7混勻，離心，取上清進行高效液相色譜串聯質譜檢測；所述免疫抑制劑為環孢霉素A、他克莫司、西羅莫司和依維莫司中的一種或多種。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，樣品檢測過程中，以同位素標記的西羅莫司作為依維莫司的內標，從而檢測依維莫司的含量。

9.維生素E用于制備免疫抑制劑溶液的穩定劑的用途，所述免疫抑制劑為環孢霉素A、他克莫司、西羅莫司和依維莫司中的一種或多種。