[發明專利]3’-O-可逆封閉的核苷酸及其在無模板酶促核酸合成中的應用在審
| 申請號： | 202110659082.0 | 申請日： | 2021-06-15 |
| 公開（公告）號： | CN113372402A | 公開（公告）日： | 2021-09-10 |
| 發明（設計）人： | 王升啟;何小羊;王學軍;丁思敏;張千曲;黃聰 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院 |
| 主分類號： | C07H19/207 | 分類號： | C07H19/207;C07H19/10;C07H1/00;C12P19/34 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 徐樂 |
| 地址： | 100082 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 可逆 封閉 核苷酸 及其 模板 核酸 合成 中的 應用 | ||
1.一種3’-O-封閉的核苷酸，其特征在于，封閉基團為氰基乙烯基。
2.根據權利要求1所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸選自脫氧腺苷酸及衍生物、脫氧鳥苷酸及衍生物、脫氧胞苷酸及衍生物、脫氧胸苷酸及衍生物、腺苷酸及衍生物、鳥苷酸及衍生物、胞苷酸及衍生物和尿苷酸及衍生物中的任一種。
3.權利要求1或2所述3’-O-封閉的核苷酸在酶促核酸合成中的應用；
優選地，所述酶為TdT酶；
優選地，所述酶促核酸合成為可逆終止的無模板酶促核酸合成。
4.權利要求1或2所述3’-O-封閉的核苷酸的制備方法，其特征在于，用3’-O-氰基乙烯基替代核苷酸的3’-OH，得到3’-O-封閉的核苷酸。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，核苷酸的3’-OH先與甲酸發生酯化反應生成甲酯，再與三苯基亞正膦基乙腈反應生成3’-O-氰基乙烯基，得到3’-O-封閉的核苷酸；
優選地，以5’-OTBDMS保護核苷為原料，5’-OTBDMS保護核苷的3’-OH先與甲酸發生酯化反應生成甲酯，再與三苯基亞正膦基乙腈反應生成3’-O-氰基乙烯基，得到3’-O-氰基乙烯基后，依次經脫除5’-OTBDMS和磷酸化，得到3’-O-封閉的核苷酸。
6.權利要求1或2所述3’-O-封閉的核苷酸的脫保護方法，其特征在于，采用裂解劑將3’-O-封閉的核苷酸中的封閉基團切割，得到3’-OH核苷酸。
7.根據權利要求6所述的脫保護方法，其特征在于，所述裂解劑為鈀絡合物，優選為二乙腈二氯化鈀；
優選地，二乙腈二氯化鈀濃度為0.04-0.06M，切割條件為55-65℃反應0.5-10min。
8.一種酶促核酸合成的方法，其特征在于，所述方法的原料包括權利要求1或2所述的3’-O-封閉的核苷酸。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述酶促核酸合成為可逆終止的無模板酶促核酸合成；
優選地，所述酶為TdT酶；
優選地，利用權利要求6或7所述的脫保護方法實現核酸延伸終止的重啟。
10.基于權利要求8或9所述方法生成核酸的合成儀器。
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