[發明專利]一種低成本多能干細胞分化造血干細胞的培養基及培養方法

在審

• 申請號: 202110652833.6
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113373115A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 曹哲厚;韋俊;吳立前;馬悅悅
• 申請（專利權）人: 杭州原生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12N5/0735;C12N5/10
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 杜放

本發明涉及一種低成本多能干細胞分化造血干細胞的培養基，包括第一階段培養基和第二階段培養基；所述第一階段培養基包括DMEM/F12基礎培養基、SCF、rhG?CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL、亞硒酸鈉、L?抗壞血酸?2?磷酸酯鎂鹽、AB血清；所述第一階段培養基中所述的SCF、rhG?CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的終濃度比為(1?2)∶(1?2)∶(0.5?1)∶(1?2)∶(1?4)∶(1?4)。與現有技術相比，本發明具備如下有益效果：本發明通過使用低成本培養基及一些必要的細胞因子代替高成本培養基，降低了多能干細胞分化成造血干細胞的成本，為今后造血干細胞的使用提供更加切實可行的方案。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種低成本多能干細胞分化造血干細胞的培養基及培養方法。

背景技術

造血干細胞(hematopoietic stem cells,HSCs)是一類多能干細胞,位于特殊的造血微環境,主要存在于骨髓中。能自我更新和多向分化為各種功能的血細胞,維持血液系統的建立和動態平衡。造血干細胞的這些重要特性以及造血干細胞移植在臨床上的廣泛應用,結合基因治療和基因編輯技術的進步,使得基于造血干細胞治療多種血液疾病和免疫疾病的基因治療研究在近年來取得了很大的進展。

許多血液學家提出CD34細胞在人體的有效輸注量為5×10/kg，一些臍帶血移植的權威們建議臍帶血有核細胞的有效劑量為3.7×10/其中CD34細胞含量按0 6％計算有22×10/kg。上述臍帶血有核細胞和CD34細胞的有效劑量都是從臨床實踐中總結出來的。因此，獲得大劑量的CD34細胞是必要的，而目前比較有效的培養基大都價格昂貴，大大提高了獲得CD34細胞的成本，對于研究用或病患用都是一個很大的問題。

現有的干細胞培養基，價格高昂，導致了干細胞的培養成本較高；并且傳統方法中的人多能干細胞誘導分化培養基中通常將多能干細胞與不同的基質細胞共同培養，如OP9細胞等，直接定向誘導分化為造血細胞；然而方法中使用OP9細胞具有未知風險，安全性低

發明內容

本發明為了克服現有技術的不足，提供一種低成本多能干細胞分化造血干細胞的培養基及培養方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：一種低成本多能干細胞分化造血干細胞的培養基，包括第一階段培養基和第二階段培養基；

所述第一階段培養基包括DMEM/F12基礎培養基、SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL、亞硒酸鈉、L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂鹽、AB血清；所述第一階段培養基中所述的SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的終濃度比為(1-2)∶(1-2)∶(0.5-1)∶(1-2)∶(1-4)∶(1-4)；

所述第二階段培養基包括RPMI-1640基礎培養基、CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO、胰島素以及AB血清；所述第二階段培養基中所述的CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO的終濃度比為(0.25-1)∶(1-2)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)∶(0.01-0.1)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)。