[發明專利]一種平板液體培養真菌的菌絲體收集方法

在審

• 申請號: 202110646648.6
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113549556A
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 師桂英;蘇國禮;楊宏宇;李瀟瀟;馬家易;李元鵬
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 胡文強

本發明公開了一種有效的真菌菌絲體收集方法，將液體培養液倒入平板中，在其中接入直徑為5?10mm的真菌菌餅，待菌絲長滿平板且液體培養液消耗殆盡時，用滅過菌載玻片將菌絲體輕輕從平板上刮下，收集真菌菌絲體。申請人發現，將菌餅接入液體培養液中，靜置而不進行振蕩，菌絲體會漂浮于培養液表面；且培養液的體積隨著培養天數的增加逐漸，直至液體培養液消耗殆盡，可將菌絲與培養液隔離，便于收集得到菌絲體。利用本發明的平板液體培養真菌菌絲體的收集方法，不僅獲得的菌絲體含水量低，并且適用范圍廣，對于較粘稠或較清澈的發酵液都適用，本發明提供的方法操作簡單快捷、成本低、節能低碳環保。

技術領域

本發明涉及真菌培養技術領域，具體為一種平板液體培養真菌的菌絲體收集方法。

背景技術

研究人員在進行真菌菌絲體的總DNA、RNA和蛋白質及相關酶的提取及參數探索等研究中，需要對菌絲體進行培養增殖。目前，真菌菌絲收集的方法一般有液體培養的菌絲體收集方法和固體培養的菌絲體收集方法兩種，而液體培養的菌絲體收集方法一般采用高速離心法和過濾法兩種，固體培養的菌絲體收集方法一般采用試管斜面或平板等固體培養基進行養菌后刮取表面菌絲體的方法，兩種方法均可以將菌絲體分離收集。但是其分離方法都存在一定不足。

高速離心法，一方面，由于某些真菌菌種液體培養的菌絲體較為粘稠，成懸浮液大顆粒狀態，因此，即使采用很高的離心速度，也難以將菌絲體完全緊湊地沉降到離心管底部，分離效果差；另一方面，菌絲球顆粒內部的水分也難以通過離心去除，并且還存在離心機成本高、操作繁瑣耗時等問題。

過濾法，目前包括采用濾紙進行真空抽濾的方法、普通紗布過濾法以及借助收集裝置過濾的方法。濾紙真空抽濾法，同樣存在由于某些真菌菌種發酵液的濃度高且粘稠，很難得到較干燥的菌絲的問題，另一方面，由于發酵液粘稠，濾紙微孔極易被發酵液堵住，因此，后續難以過濾，必須不斷更換濾紙，而且由于濾紙濕潤后容易被刮破，因此吸附在濾紙上的菌絲體整取下來需要較高的技術要求。過濾法一般用紗布過濾與過濾裝置過濾：紗布法過濾時，由于紗布易沾菌絲，在樣品數量多的情況下易造成不同樣品間的菌絲交叉污染，不可重復利用，從而造成不必要的浪費，并且在采用紗布過濾時，紗布層數少則菌絲容易漏出，層數多時，每層紗布間及紗布孔中容易殘留菌絲，易造成樣品的浪費和數據的誤差；利用過濾裝置過濾，收集菌絲時，收集的菌絲干燥度不夠；另一方面，購買過濾裝置需要一定的前期投入，增加了成本。

試管斜面或平板等固體培養菌絲體后刮取表面菌絲體的方法，一方面菌絲量太小難以滿足實驗需求，另一方面，刮取菌絲體過程中難免帶入固體培養基，不僅操作麻煩繁瑣，而且影響后續分子生物實驗的開展及實驗結果的準確性。

因此亟需設計一種平板液體培養真菌的菌絲體收集方法來解決上述問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種平板液體培養真菌的菌絲體收集方法，以解決上述背景技術中提出因素問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種平板液體培養真菌的菌絲體收集方法，包括如下結構：

且其生產工藝方法如下：

步驟一：將真菌培養平板通過清水進行清洗至潔凈；

步驟二：將清洗后的真菌培養平板排布在真菌培養室內；

步驟三：將真菌菌餅接入盛有少量液體培養液的平板中，靜置于適合真菌生長的環境下培養數天；

步驟四：待菌絲體長滿培養基，且液體培養基消耗殆盡后收集真菌菌絲體。

優選的，在步驟四制備過程中，待菌絲體長滿培養基且液體培養基消耗殆盡后，用載玻片或者手術刀刮下真菌菌絲體并將其收集。

優選的，所述在步驟四制備過程中，培養基為液體培養基。

優選的，所述在步驟三制備過程中，液體培養液是倒置在平板中的。