[發明專利]一種鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請號: 202110640131.6
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113549686A
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 劉丹;易倩春
• 申請（專利權）人: 湖南菲思特精準醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262
• 代理人: 安曼

1.一種鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒用于檢測鈣離子拮抗劑的代謝相關基因CYP3A5*3和NPPA T2238C的基因多態性，試劑盒包括如下組分：CYP3A5*3擴增引物、CYP3A5*3測序引物、NPPA T2238C擴增引物、NPPA T2238C測序引物和陽性對照。

2.根據權利要求1所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述CYP3A5*3擴增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根據權利要求1所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述NPPA T2238C擴增引物如序列表SEQ ID NO:3～4所示。

4.根據權利要求1所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述CYP3A5*3測序引物如序列表SEQ ID NO:5所示，NPPA T2238C測序引物如序列表SEQ ID NO:6所示。

5.根據權利要求1所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述所述測序引物為瓊脂糖凝膠顆粒與氨基標記的DNA序列的結合物。

6.根據權利要求1所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括擴增緩沖液、18mM醋酸鎂、dNTPS、鏈置換DNA聚合酶、單鏈DNA結合蛋白、結合單鏈核酸的重組酶和海藻糖。

7.根據權利要求6所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑2中各組分終濃度為：CYP3A5*3擴增前后引物各0.4uM，NPPA T2238C擴增前后引物各0.4uM，dNTPS 0.3mM，鏈置換DNA聚合酶1.2ng/μL，單鏈DNA結合蛋白3.2ng/μL，結合單鏈核酸的重組酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。

8.根據權利要求1所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照包括濃度為20ng/ul的CYP3A5*3和NPPA T2238C雜合型基因組DNA。

9.一種采用根據權利要求1～8任一項所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

a.將所述擴增反應液與5ul待測基因組DNA，采用多重RPA擴增進行擴增；

b.將10ul反應產物與3ul測序引物分別進行結合；

c.焦磷酸測序；

d.確定CYP3A5*3位點和NPPA T2238C位點的基因型。

10.一種采用根據權利要求1～8任一項所述的鈣離子拮抗劑代謝標志物的檢測試劑盒的應用，其特征在于，所述檢測試劑盒用于體外檢測待測樣本中的CYP3A5*3和NPPA T2238C基因多態性。