[發明專利]一種間充質干細胞無血清培養基

在審

• 申請號: 202110638431.0
• 申請日: 2021-06-08
• 公開（公告）號: CN113403271A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 馬旭;郭昌龍;高建恩
• 申請（專利權）人: 國家衛生健康委科學技術研究所
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/074;A61K35/28;A61K35/12;A61P17/02;A61P37/02
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠;萬麗

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種間充質干細胞無血清培養基。本發明提供的無血清培養基成分包括基礎培養基和添加成分，所述添加成分包括JNK通路抑制劑、ERK1/2通路抑制劑、P38MAPK通路抑制劑和氨基乙醇，所述的JNK通路抑制劑包括但不限于SP600125，ERK1/2通路抑制劑包括但不限于PD0325901，P38MAPK通路抑制劑包括SB202190、SB203580和BIRB796中的至少一種。本發明間充質干細胞的培養基，不含有FBS，無異源動物源性成分，降低細胞污染的幾率，同時對MSC的擴增起到促進作用。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種間充質干細胞無血清培養基。

背景技術

干細胞根據分化能力的不同可以分為全能干細胞、多能干細胞、祖細胞等，而根據來源不同又可以分為胎盤干細胞、脂肪干細胞、造血干細胞等。間充質干細胞(MSC,mesenchymal stem cells)是干細胞家族的重要成員，來源于發育早期的中胚層，屬于多能干細胞，MSC最初在骨髓中發現，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注。如間充質干細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、心肌、內皮等多種組織細胞，連續傳代培養和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。目前間充質干細胞臨床應用于解決多種血液系統疾病，心血管疾病，肝硬化，神經系統疾病，膝關節半月板部分切除損傷修復，自身免疫性疾病等方面取得了重大突破，挽救了更多病患的生命。此外，間充質干細胞在神經系統修復及更多方面具有長遠的發展前景。

雖然目前動物實驗及部分臨床研究發現MSC對于促進組織修復、調節異常免疫反應具有較好的治療效果，但是MSC應用中仍有諸多問題沒有解決:首先體外大規模擴增是實現MSC臨床治療的前提，但是目前MSC的體外擴增體系尚沒有達成一致：根據培養基種類的不同，MSC擴增體系可以分為含有胎牛血清的培養體系和成分明確的、無動物源性成分、不含血清的培養體系。

基于胎牛血清的培養體系目前被證明是MSC細胞最有效的培養體系，在此體系下MSC細胞呈現出優良的增值能力、分化能力，具有良好的臨床治療潛力，但是胎牛血清存在的主要問題是沒有特異性指標來評價血清質量，所以不同產地、批次間的胎牛血清質量存在不同，培養出的細胞質量也會有差別，研究證實用劣質血清培養MSC細胞，細胞會提前出現“老化”現象，表現為細胞外形變得非紡錘形、端粒酶逐漸縮短、細胞增殖能力下降、細胞向骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等分化潛能也顯著減弱的現象。因此越來越多的研究者目前采用成分明確的、無動物源性成分、不含血清的培養體系培養MSC細胞，從目前的結果看無血清體系可以支持MSC細胞長期培養，但是與胎牛血清體系相比仍存在不足，主要問題是細胞增殖緩慢且分化能力有差別。目前最理想的血清替代物是人血小板裂解液，其既可以避免胎牛血清帶來的異種病毒污染的可能，又能完全代替血清促進MSC的體外培養，但血小板裂解液的來源是目前存在的主要問題，高額的價格極大的限制了其應用規模。

發明內容

在一些實施方案中，本發明提供了一種無血清培養基，包括基礎培養基和添加成分，所述添加成分包括JNK通路抑制劑、ERK1/2通路抑制劑、P38 MAPK通路抑制劑和氨基乙醇，所述的JNK通路抑制劑包括但不限于SP600125，ERK1/2通路抑制劑包括但不限于PD0325901，P38 MAPK通路抑制劑包括SB202190、SB203580和BIRB796中的至少一種。

在一些實施方案中，所述基礎培養基包括DMEM/F12、a-MEM、DMEM或IMDM。

在一些實施方案中，所述基礎培養基還可以是Knock out DMEM/F12。

在一些實施方案中，所述SP600125、PD0325901、P38 MAPK通路抑制劑和氨基乙醇的濃度分別為1-10uM，1-10uM，1-10uM和0-10mg/L。