[發(fā)明專利]一種蛹蟲草菌株液態(tài)發(fā)酵的方法

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• 申請日: 2021-06-08
• 公開（公告）號: CN113373058A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 尚成榮;王躍霖;李天洋;鄭思寧;董建;朱仕益;高云龍
• 申請（專利權）人: 安徽省百麓現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產(chǎn)權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

本發(fā)明公開了一種蛹蟲草菌株液態(tài)發(fā)酵的方法，包括以下步驟：（1）菌株活化：將保存的蛹蟲草菌株接種于PDA斜面培養(yǎng)基中，于生化培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基；（2）種子培養(yǎng)：從上述PDA斜面培養(yǎng)基中用接種針切取帶培養(yǎng)基的斜面菌絲，接種于種子培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；（3）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：將上述所得種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本發(fā)明蛹蟲草菌株液態(tài)發(fā)酵方法采用三步法，通過菌株活化、種子培養(yǎng)和液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)實現(xiàn)蛹蟲草菌株的高效培育，各步驟依次進行，針對性更強，能大大縮減蛹蟲草生產(chǎn)周期，同時操作簡單易掌握。

技術領域

本發(fā)明屬于食用菌培養(yǎng)技術領域，尤其涉及一種蛹蟲草菌株液態(tài)發(fā)酵的方法。

背景技術

蛹蟲草隸屬于真菌界、子囊菌門、子囊菌綱、糞殼菌亞綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬。蛹蟲草是非常著名的藥食兩用的子囊真菌，也是獲得蟲草素的主要來源，具有很高的開發(fā)利用價值。近年來，隨著野生冬蟲夏草資源的日漸枯竭，其價格不斷攀升，從而促使人們尋找野生冬蟲夏草的替代品。由于蛹蟲草具有與冬蟲夏草相近的藥用與食用價值，加之蛹蟲草更加容易馴化，因此受到人們越來越多的關注。

蛹蟲草菌種的制備是生產(chǎn)過程中的一個重要環(huán)節(jié)。一般蛹蟲草菌種的生產(chǎn)采用三級制種方法。即母種、原種、生產(chǎn)種。要想生產(chǎn)出合格的菌種，必須先培育出母種，而后由母種制成原種，由原種制成生產(chǎn)種，而后用生產(chǎn)種轉(zhuǎn)接至小麥培養(yǎng)基，再進行培養(yǎng)子實體管理。其中原種和生產(chǎn)種可利用液態(tài)發(fā)酵技術進行制種。

液態(tài)發(fā)酵技術是現(xiàn)代生物技術之一，它是指在生化反應器中，模仿自然界將菌株在生育過程中所必需的糖類、有機和無機含有氮素的化合物、無機鹽等一些微量元素以及其它營養(yǎng)物質(zhì)溶解在水中作為培養(yǎng)基，滅菌后接入菌種，提供適于菌體代謝所需要的環(huán)境，并控制適宜的外界條件，進行大量培養(yǎng)繁殖的過程。工業(yè)化大規(guī)模的發(fā)酵培養(yǎng)即為發(fā)酵生產(chǎn)，亦稱深層培養(yǎng)或沉沒培養(yǎng)。發(fā)酵液直接供作藥用或供分離提取，也可以作液體菌種。

由于傳統(tǒng)工藝中液體配方的營養(yǎng)不全面，導致蛹蟲草發(fā)菌慢，生產(chǎn)周期長，能耗大，同時我國尚未頒布統(tǒng)一的蛹蟲草質(zhì)量控制標準，因此在蛹蟲草菌株培育領域亟需高效優(yōu)質(zhì)的液態(tài)發(fā)酵方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的就是為了彌補已有技術的缺陷，提供一種蛹蟲草菌株液態(tài)發(fā)酵的方法。

為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

一種蛹蟲草菌株液態(tài)發(fā)酵的方法，包括以下步驟：

（1）菌株活化：將保存的蛹蟲草菌株接種于PDA斜面培養(yǎng)基中，于生化培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基；

（2）種子培養(yǎng)：從上述PDA斜面培養(yǎng)基中用接種針切取帶培養(yǎng)基的斜面菌絲，接種于種子培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

（3）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：將上述所得種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

進一步的，所述步驟2中種子培養(yǎng)基由以下質(zhì)量比例的原料制成：蛋白胨20-25g、蔗糖25-30g、硝酸鈉2.5-3g、磷酸二氫鉀0.8-1.2g、硫酸鎂0.3-0.5g、硫酸亞鐵0.01-0.02g、氯化鉀0.3-0.5g、玻璃纖維5-10g、水800-1000g。

優(yōu)選的，所述玻璃纖維為短切玻璃纖維，其長度控制為6-12mm。

優(yōu)選的，所述步驟2中培養(yǎng)箱溫度控制為24-27℃，震蕩速度控制為130-150r/min，培養(yǎng)時間為72-96小時。

進一步的，所述步驟3中發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量比例的原料制成：蛋白胨15-20g、蔗糖10-15g、馬鈴薯240-300g、桑葚勻漿液5-10g、磷酸二氫鉀0.8-1g、硫酸鎂0.3-0.5g、維生素B1 0.01-0.02g、氯化鉀0.3-0.5g、水800-1000g。