[發明專利]一種適配體分子探針修飾的多孔微針貼片及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110626443.1
• 申請日: 2021-06-04
• 公開（公告）號: CN113352654B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 趙遠錦;易可馨;池俊杰;王月桐;商珞然
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: B29C70/58
• 分類號: B29C70/58;B29C33/38;B29C33/40;G01N21/64;A61B5/00;A61B5/145
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 劉佳慧

本發明公開了一種適配體分子探針修飾的多孔微針貼片及其制備方法和應用，制備方法包括以下步驟：步驟一、制備PDMS針狀孔微針陣列模板；步驟二、將造孔劑表面包覆上一層生物粘合劑，制得造孔材料；步驟三、將所述造孔液和微針原材料溶液分步依次灌注入PDMS針狀孔微針陣列模板中，待造孔液和微針原材料溶液固化后進行剝離處理，得到含造孔材料的微針貼片；步驟四、制備多孔微針貼片：將含造孔材料的微針貼片與造孔刻蝕劑進行反應，造成孔洞，制得多孔微針貼片；步驟五、制備適配體分子探針修飾的多孔微針貼片：將多孔微針貼片和適配體分子探針在緩沖液中反應，得到適配體分子探針修飾的多孔微針貼片。本發明具有簡單、方便、高效等優點。

技術領域

本發明屬于生物醫用材料技術領域，涉及一種微針貼片，尤其涉及一種適配體分子探針修飾的多孔微針貼片及其制備方法和應用。

背景技術

隨著現代醫學的進步和人民生活水平的提高，人們對臨床檢測的需求量日益增加。體液檢測是一種較常見的臨床檢測類型，其中血液檢測占比最大。血液檢測的采樣通常使用注射器或真空采血管進行。但這種抽樣方法往往給患者帶來痛苦和心理壓力，并且這些影響可能會導致某些生理指標發生波動，從而降低測試結果的準確性。微針陣列是一種很具有創新性的微結構材料，近年來已經被開發用于體液采樣。然而，常見的微針陣列在制造過程中通常需要復雜的微加工技術，制造成本高，并且常需要例如體液回收等后續處理。

發明內容

針對上述現有技術的不足，本發明提供一種適配體分子探針修飾的多孔微針貼片及其制備方法和應用，通過微針原材料的親水作用以及微針的多孔結構提取皮膚間質液，并且基于孔壁上固定的適配體分子探針捕獲皮膚間質液中的內毒素，有利于提高皮膚間質液內毒素檢測的效率，并且簡化了操作步驟。

為實現上述目的，本發明提供一種適配體分子探針修飾的多孔微針貼片的制備方法，具有這樣的特征：包括以下步驟：

步驟一、制備PDMS針狀孔微針陣列模板：將PDMS(Polydimethylsiloxane)和固化劑配制成待固化PDMS，PDMS和固化劑的質量比為10∶1；然后將該待固化PDMS轉移到在ETPTA(Ethoxylated trimethylolpropane triacrylate)微針陣列陽模板表面；將該體系抽真空處理15分鐘，然后在70-80℃下加熱固化；冷卻后進行剝離處理，制得PDMS針狀孔微針陣列模板；

步驟二、制備造孔材料：將造孔劑表面包覆上一層生物粘合劑，制得造孔材料；

步驟三、制備含造孔材料的微針貼片：將微針原材料溶液和造孔材料混合配制成造孔液，造孔材料的質量體積百分數為12％；然后將所述造孔液和微針原材料溶液(另一微針原材料溶液，非造孔液中的微針原材料溶液)分步依次灌注入PDMS針狀孔微針陣列模板中，造孔液和微針原材料溶液的灌注體積比為130∶400；待造孔液和微針原材料溶液固化后進行剝離處理，得到含造孔材料的微針貼片；

步驟四、制備多孔微針貼片：將含造孔材料的微針貼片與造孔刻蝕劑進行反應，造成孔洞，制得多孔微針貼片；具體方法為：將含造孔材料的微針貼片浸泡在造孔刻蝕劑中進行反應12小時，待反應結束后，造孔完成，得到多孔微針貼片；

其中，造孔劑為可被造孔刻蝕劑腐蝕的微球顆粒；

步驟五、制備適配體分子探針修飾的多孔微針貼片：將多孔微針貼片和適配體分子探針在緩沖液中反應；緩沖液為PBS緩沖液，濃度為0.01M，pH為7.2-7.4；緩沖液的用量為滿足浸沒多孔微針貼片；適配體分子探針在反應體系中的濃度為1μM；利用生物粘合劑的粘性將適配體分子探針連接在多孔微針貼片的孔壁上，然后用封閉液進行封閉處理，減少后續檢測中的非特異性吸附，得到適配體分子探針修飾的多孔微針貼片。

進一步，本發明提供一種適配體分子探針修飾的多孔微針貼片的制備方法，還可以具有這樣的特征：其中，步驟二中，所述造孔劑為硅酸鹽微球或玻璃微珠，直徑為20-50μm；步驟四中，所述造孔刻蝕劑為氫氟酸溶液，體積百分數為20％。