[發明專利]7種蘋果品種特異性分子標記及其篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202110620751.3
• 申請日: 2021-06-03
• 公開（公告）號: CN113215300B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 周揚顏;黃曉毅;厲龍飛;王彥娟;尼秀媚
• 申請（專利權）人: 山東大豐園農業有限公司;濰坊科技學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京知企鴻蒙專利代理事務所(普通合伙) 11692
• 代理人: 劉帥帥

本發明公開了我國大面積栽培的7種蘋果主栽品種的特異性分子標記及其篩選方法和應用，包括下列步驟：（1）取葉片提取基因組DNA；（2）按照簡化基因組測序技術Super?GBS方法構建文庫，文庫質檢合格后上機測序；（3）對測序數據進行過濾后，使用GATK獲得SNP位點，并對SNP進行過濾，以提高SNP的準確性；（4）根據每個品種的分型結果篩選7種蘋果中至少有一個品種與其他品種不同的位點；（5）根據上述篩選策略，最終篩選到10個鑒定7種蘋果的SNP位點；（6）基于這些位點標記開發出一種簡便、快速、可靠鑒定7種蘋果的PCR方法，7種蘋果品種的鑒定方法對于我國傳統蘋果品種栽培模式繼承和研究、新品種培育研究、資源保護、種苗繁育，以及我國老舊果園更新換代具有重要的應用價值。

技術領域

本發明涉及7種蘋果品種特異性分子標記及其篩選方法和應用，屬于生物技術領域。

背景技術

蘋果為薔薇科(Rosaceae)蘋果亞科(Maloideae)蘋果屬(Malus MILL.)植物。我國蘋果種植面積和產量均占全世界40％以上，栽培模式以傳統的喬化或矮化中間砧為主。目前國外引進矮化自根砧經過十幾年的試驗示范推廣，已在新建果園廣泛采用，且產生極為明顯的生產優勢。我國一些國外引進、種植時間較長的品種，也開始適應新的種植模式。

國光蘋果是一種原產于美國的蘋果栽培種，培育于1700年代末期，1600年發現的偶然實生苗，1872年傳入日本。大約1905年傳入中國，1980年時，北京的國光蘋果的栽培已經占蘋果總栽培面積的50--60％，引進的百年間，國光蘋果一直是我國最重要的蘋果品種之一。

金冠又稱金帥，也稱黃香蕉或黃元帥。美國引時品種，是1914年AndersonH.Mullins在美國西維幾尼亞州Clay縣自家的果園內發現的偶然實生樹。曾是我國栽培面積較廣的傳統優良品種之一，也是世界蘋果栽培面積較大的品種。

蜜脆是西北農林科技大學于2001年從美國引進的品種，該品種由Macoun(果肉芳香)為母本，Honeygold(味甜、肉脆)為父本雜交而來，樹勢中庸偏強，一年生枝條略顯褐色，成花容易，較豐產，穩產性好。

金粉蘋果由意大利引進，是新紅星蘋果(紅蛇果)與金冠的雜交品種，意大利桑西公司獨家產權。枝條緊湊，生長力強，產量高而穩定，無大小年現象。根據2007年ISAFRUIT歐洲口味小組的評估，它是歐盟12個最普通品種中最好的一個。

甜石頭1號和甜石頭2號品種由意大利引進，產量高而且穩定，無大小年。果肉結實，酸度低，含糖量高，有芳香味，口感宜人。

華紅是中國農科院果樹研究所選育的大型、優質、晚熟、耐貯、抗性強的紅色蘋果新品種，于1998年通過遼寧省品種審定委員會審定。較紅富士、喬納金、新紅星抗寒性強，抗旱、抗褐斑能力強，表現高產穩產。

本發明涉及的上述7個品種，是我國近100年來引進和自主培育種植的主要蘋果品種，曾在我國蘋果種植產業中占據重要地位，也在我國近年來新品種培育和引進中發揮重要作用。7種蘋果品種的鑒定方法對于我國傳統蘋果品種栽培模式繼承和研究、新品種培育研究、資源保護、種苗繁育，以及我國老舊果園更新換代具有重要的應用價值。

發明內容

本發明提供一種7種蘋果品種的特異性分子標記的篩選方法，并應用該方法篩選到10個品種特異的SNP標記，基于這些標記開發出一種簡便、快速、可靠鑒定7種蘋果品種的PCR方法，為從源頭上準確控制蘋果品種奠定技術基礎。本發明所述的7種蘋果品種包括華紅、國光、金粉、金冠、蜜脆、甜石頭1號和甜石頭2號。

為解決上述技術問題，本發明采用下述技術方案予以實現：

首先，本發明提供一種利用簡化基因組測序技術Super-GBS篩選7種蘋果品種的特異性分子標記的方法，包括如下步驟：

(1)利用品種已知且品種準確的華紅、國光、金粉、金冠、蜜脆、甜石頭1號和甜石頭2號蘋果品種為樣品，取葉片提取基因組DNA；