[發(fā)明專利]一種蛋白酶K突變體及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110603716.0 | 申請日： | 2021-05-31 |
| 公開（公告）號： | CN113234707B | 公開（公告）日： | 2022-11-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊廣宇;趙陽;徐燦;羅漫杰;王梁;施婧妮;宮安 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢瀚海新酶生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/58 | 分類號： | C12N9/58;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 430223 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 蛋白酶 突變體 及其 制備 方法 | ||
1.一種林伯氏白色念球菌(
（a）在SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的基礎(chǔ)上，將第356位苯丙氨酸突變?yōu)楦彼幔?/p>
（b）在（a）的基礎(chǔ)上，還具有如下至少一種突變：Y151A、K208H、S273T、G293A、K332R、S337N。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白酶K突變體，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。
3.編碼權(quán)利要求1或2所述蛋白酶K突變體的成熟肽的多核苷酸。
4.包含權(quán)利要求3所述多核苷酸的核酸構(gòu)建體、載體或宿主細(xì)胞。
5.一種重組畢赤酵母，其特征在于，以畢赤酵母為宿主，表達(dá)權(quán)利要求1或2所述的蛋白酶K突變體。
6.產(chǎn)生權(quán)利要求1或2所述蛋白酶K突變體的方法，其特征在于，包括：
（a）在適合于表達(dá)所述蛋白酶K的條件下培養(yǎng)重組微生物細(xì)胞；所述重組微生物細(xì)胞表達(dá)權(quán)利要求1或2所述的蛋白酶K突變體；以及
（b）任選地回收所述蛋白酶K。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將權(quán)利要求5所述的重組畢赤酵母在培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時間后，用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)蛋白酶K的表達(dá)。
8.含有權(quán)利要求1或2所述的蛋白酶K突變體的組合物。
9.一種提高蛋白酶K熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，包括（a）或（b）：
（a）將SEQ ID NO.2所示的林伯氏白色念球菌(
（b）在（a）的基礎(chǔ)上，還進(jìn)行如下至少一種突變：Y151A、K208H、S273T、G293A、K332R、S337N。
10.權(quán)利要求1或2所述的蛋白酶K突變體在分解與疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸C末端鄰接的酯鍵和/或肽鍵中的應(yīng)用。
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