[發明專利]一種用于檢測人HLA-B*1502基因突變的特異性引物探針組合及其試劑盒，以及方法

在審

• 申請號: 202110594503.6
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113308532A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 何炯;魏寧;張輝;查廣彬
• 申請（專利權）人: 上海康黎診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6881;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 余永莉

本發明提供一種用于檢測人HLA?B*1502基因突變的特異性引物探針組合，包括以下引物和探針序列：針對人HLA?B*1502基因的引物和探針序列如SEQ ID No.1～3所示，針對內參基因人RPPH基因片段的引物和探針序列如SEQ ID No.4～6所示。本發明還提供一種用于檢測人HLA?B*1502基因突變的試劑盒和方法。本發明解決了現有技術中針對人HLA?B*1502基因突變檢測的方法及試劑盒存在過程繁瑣、操作復雜、耗時長、成本高的問題，實現了對人HLA?B*1502基因突變的簡單快速，又很高準確性的檢測，從而有效地減少患者服用卡馬西平等藥物所致的SJS/TEN的發生。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，更具體地涉及一種用于檢測人 HLA-B*1502基因突變的特異性引物探針組合及其試劑盒，以及方法。

背景技術

癲癇是由多種病因引起的一種慢性腦部疾病，主要特點是由于大腦神經元反復、過度的同步化放電并導致發作性、突然性、短暫性的腦功能紊亂，同時伴有臨床各型癲癇發作和腦電圖癇性波及其他的異常改變。卡馬西平(CBZ)、拉莫三嗪(LTG)、奧卡西平(OXC)、苯妥英鈉(PHT)以及妥泰 (PB)都具有相似的芳香族結構，是廣泛使用的用于控制癲癇、三叉神經痛等的抗癲癇藥物(AEDs)。然而，該類藥物通常會導致皮膚不良反應(cADRs)，長期困擾著臨床醫生。cADRs占所有報道的藥物不良反應的10％-30％，包括輕度的斑丘疹(MPE)、藥物超敏反應綜合癥(HSS)到重型的有潛在致命性的Stevens-Johnson綜合癥(SJS)和/或中毒性表皮壞死松解癥 (Toxicepidermal necrolysis，TEN)。

由于SJS的致死率在5％，而TEN的致死率在30％左右，所以一旦患者服用卡馬西平誘發SJS/TEN，可能導致很嚴重的后果，并可能造成不可挽回的損失。已有研究表明，通過篩查HLA-B*15:02基因突變，并且按照檢測結果干預治療方案可以減少患者服用卡馬西平所致 SJS/TEN的發生。

目前常見的用于檢測HLA-B1502基因突變方法有PCR-sanger測序法、 qPCR法，以及二代測序法、PCR電泳法等。其中，PCR-sanger測序法優點是結果準確，但是其缺點是過程繁瑣，操作復雜，并且耗時長，通量低。二代測序與sanger測序法優缺點相似，同時結果準確，但是操作復雜，耗時長，同時測序成本也很高。PCR電泳法等操作繁瑣，耗時較長。qPCR的方法是常用的檢測HLA-B1502基因突變的方法。

目前市面上用于檢測HLA-B*15：02基因突變的qPCR試劑盒中，包括：采用染料法的試劑盒，以及采用探針法的試劑盒。總的來說，探針法的靈敏度較高，對模板需求量比較少，而染料法如果不使用溶解曲線解析，則無法做到多個靶標同時擴增，如果使用溶解曲線解析，那耗時將比探針法長。 qPCR試劑盒有采用一套PCR引物探針進行HLA-B*15：02基因突變鑒定的，也有采用兩套或者三套鑒定的。在中國地區，一套與兩套或者三套的檢測結果相差不大，準確率相差不到1％。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測人HLA-B*1502基因突變的特異性引物探針組合及其試劑盒，以及方法，從而解決現有技術中針對人 HLA-B*1502基因突變檢測的方法及試劑盒存在過程繁瑣、操作復雜、耗時長、成本高的問題。

為了解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：