[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)臨床樣本中GI.1型諾如病毒的試劑盒及專(zhuān)用引物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110589863.7
• 申請(qǐng)日: 2021-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113186354B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱寶利;毛夢(mèng)雨;律娜;張瑞芬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發(fā)明公開(kāi)了用于檢測(cè)臨床樣本中GI.1型諾如病毒的試劑盒及專(zhuān)用引物。本發(fā)明提供了引物對(duì)Ⅱ。本發(fā)明還提供了引物組合，由引物對(duì)Ⅰ和引物對(duì)Ⅱ組成。本發(fā)明還提供了引物對(duì)Ⅰ。引物對(duì)Ⅱ由序列表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子組成。引物對(duì)Ⅰ由序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成。本發(fā)明可用于直接檢測(cè)糞便中的GI.1型諾如病毒，可以極大地縮短檢測(cè)的時(shí)間，減少檢測(cè)的費(fèi)用。本發(fā)明應(yīng)用前景廣闊，為檢測(cè)樣本諾如病毒分型信息提供了新的思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及用于檢測(cè)臨床樣本中GI.1型諾如病毒的試劑盒及專(zhuān)用引物。

背景技術(shù)

諾如病毒(norovirus)屬于杯狀病毒科，是一類(lèi)單正鏈RNA病毒，基因組大小為7.5-7.7k，直徑約為27-37nm，無(wú)囊膜。諾如病毒的基因組包含3個(gè)開(kāi)放閱讀框(openreading frame，ORF)，ORF1編碼包含RNA依賴(lài)性RNA聚合酶(RdRp)在內(nèi)的非結(jié)構(gòu)多聚蛋白，ORF2編碼主要衣殼蛋白(VP1)，ORF3編碼次要衣殼蛋白(VP2)。根據(jù)諾如病毒主要衣殼蛋白VP1的氨基酸同源性的不同，將其劃分為10個(gè)基因型(GI-GX)，引起人類(lèi)感染的主要是GI和GII型。不同的基因型又可以進(jìn)一步劃分為不同的亞型，其中GI型劃分為9個(gè)亞型(GI.1-GI.9)，GII型劃分為27個(gè)亞型(GII.1-GII.27)。

諾如病毒是一種傳染性極強(qiáng)的消化道病毒，隨著多個(gè)國(guó)家輪狀病毒疫苗計(jì)劃免疫的逐步推廣，諾如病毒已經(jīng)取代輪狀病毒，成為引起急性腸胃炎的主要病原體，對(duì)食品安全和公共衛(wèi)生造成了很大的威脅。諾如病毒主要經(jīng)糞-口途徑傳播，可通過(guò)食物、水、嘔吐物形成的氣溶膠及環(huán)境污染等引發(fā)疫情，容易在幼兒園、中小學(xué)、養(yǎng)老院、酒店及輪船等人口聚集且空間相對(duì)封閉的環(huán)境爆發(fā)流行。諾如病毒引起的臨床癥狀主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、發(fā)熱、腹痛和腹瀉等。諾如病毒可以感染各個(gè)年齡階段的人群，其所引起的感染是一種自限性疾病，但在免疫低下的人群、老年人和兒童可以引起嚴(yán)重的并發(fā)癥。

到目前為止，由于沒(méi)有有效的方式成功培養(yǎng)諾如病毒，分子水平上的檢測(cè)是臨床上檢測(cè)諾如病毒的主要方法。不同基因分型的諾如病毒傳播方式有所不同，及時(shí)得到諾如病毒的分型信息，可以幫助推斷傳播途徑，有助于疫情的調(diào)查。目前，獲得諾如病毒亞型分型信息主要基于諾如病毒全基因組的獲得，耗時(shí)長(zhǎng)并且費(fèi)用高，并且市場(chǎng)上沒(méi)有可以直接獲得諾如病毒亞型分型信息的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于檢測(cè)臨床樣本中GI.1型諾如病毒的試劑盒及專(zhuān)用引物。

本發(fā)明提供了引物對(duì)Ⅱ，由序列表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子組成。所述引物對(duì)Ⅱ中，兩種引物的摩爾配比為1:1。

本發(fā)明還提供了引物組合，由引物對(duì)Ⅰ和引物對(duì)Ⅱ組成；

引物對(duì)Ⅰ由序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成；

引物對(duì)Ⅱ由序列表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子組成。

所述引物對(duì)Ⅰ中，兩種引物的摩爾配比為1:1。

所述引物對(duì)Ⅱ中，兩種引物的摩爾配比為1:1。

本發(fā)明還提供了引物對(duì)Ⅰ，由序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成。所述引物對(duì)Ⅰ中，兩種引物的摩爾配比為1:1。

本發(fā)明還保護(hù)所述引物對(duì)Ⅱ或所述引物組合或所述引物對(duì)Ⅰ在制備試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還保護(hù)一種試劑盒，包括所述引物對(duì)Ⅱ或所述引物組合或所述引物對(duì)Ⅰ。

具體的，所述試劑盒還包括：DreamTaq Green PCR Master Mix(2X)。