[發明專利]共同檢測流行性出血病病毒和帕利亞姆血清群病毒的RPA-LFD引物、探針及試劑盒

有效

• 申請號: 202110587459.6
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113265488B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 李卓然;廖德芳;楊恒;李占鴻;楊振興
• 申請（專利權）人: 云南省畜牧獸醫科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;于洪

1.共同檢測流行性出血病病毒和帕利亞姆血清群病毒的RPA-LFD引物和探針，其特征在于：

引物包括EHDV的RPA-LFD檢測引物和PALV的RPA-LFD檢測引物；

EHDV的RPA-LFD檢測引物，包括上游引物EHDV_F和下游引物EHDV_R，核苷酸序列如下：

上游引物EHDV_F：tggattgcctgttttacatgattcaacttggga；（SEQ ID NO.1）；

下游引物EHDV_R：Bio-taacgcttgacgaacgatgacataactttcacccctaaac；（SEQ IDNO.2）；

PALV的RPA-LFD檢測引物，包括上游引物PALV_F和下游引物PALV_R，核苷酸序列如下：

上游引物PALV_F：tactaaaatttcaagagggttttctcataaattgg；（SEQ ID NO.3）；

下游引物PALV_R：Bio-ggtcataactatattaagcgattcataataagcccc；（SEQ ID NO.4）；

與所述引物配合使用的探針為nfo探針，其核苷酸序列分別為：

EHDV_Probe：DIG-tttattgaacaaagagcgaagaacgaaatg[THF]aaatatatggagaca[C3-spacer]；（SEQ ID NO.5）；

PALV_Probe：FITC-tgaggatggttttactatgtatttaattcg[THF]gatccattgtgtgct[C3-spacer]；（SEQ ID NO.6）。

2.含有權利要求1所述引物和探針的試劑盒。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括：陰性對照模板、陽性對照模板、反轉錄試劑、擴增試劑和PCRD Nucleic Acid Detector。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的陰性對照模板為RNase-free水；所述的陽性對照模板為EHDV Seg-1 DNA片段和PALV Seg-1 DNA片段。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的陽性對照模板的拷貝數為：EHDVSeg-1 DNA片段 7.1×10¹³拷貝/μL，PALV Seg-1 DNA片段 6.8×10¹³拷貝/μL。

6.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，反轉錄試劑包括5×PrimeScript RTMaster Mix和RNase-free水。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒的反轉錄體系為：5×PrimeScript RT Master Mix，2.0 μL；

總RNA，5.0 μL；

RNase-free水，3.0 μL；

總計10.0 μL；

反轉錄程序為：反轉錄37 ℃，15 min，共1個循環；反轉錄酶的失活85 ℃，5 s，共1個循環。