[發(fā)明專利]一種鑒定血痕遺留時(shí)間的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110586595.3
• 申請(qǐng)日: 2021-05-27
• 公開（公告）號(hào): CN113293164B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)江偉;程鳳;李萬(wàn)婷;漆小琴;張曉夢(mèng);李娜;黨麗虹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12Q1/6888;C12Q1/686;G06N20/00;G16B5/00;G16B25/20
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 尉月麗

本發(fā)明提供了一種鑒定血痕遺留時(shí)間的方法，通過(guò)檢測(cè)血跡中hsa?miR106b?5p、hsa?miR155?5p、hsa?miR16?5p、hsa?miR140?5p、hsa?miR423?3p、hsa?miR423?5p、hsa?miR93?5p、hsa?miR222?3p、hsa?miR483?3p、hsa?miR139?5p、hsa?miR142?5P、hsa?miR191?5p的相對(duì)表達(dá)量推測(cè)血痕遺留時(shí)間。本發(fā)明提供的鑒定方法對(duì)血跡樣本的檢測(cè)受環(huán)境影響較小；無(wú)需傳統(tǒng)方法的降解處理，檢測(cè)時(shí)間短，結(jié)果誤差更小；利用24h節(jié)律變化的microRNA，使用機(jī)器學(xué)習(xí)的方法構(gòu)建預(yù)測(cè)模型，相比其他方法可以更加精確地推斷血痕的離體時(shí)間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于法醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種推斷血痕遺留時(shí)間的方法。

背景技術(shù)

血痕是一種在案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)比較常見的生物性檢材，血痕對(duì)于案發(fā)時(shí)間、案發(fā)性質(zhì)的推測(cè)和案件重塑等方面均具有重大作用。目前對(duì)于血痕遺留時(shí)間的推測(cè)主要利用RNA或DNA在體外的降解時(shí)間來(lái)進(jìn)行反向推測(cè)。

中國(guó)專利202010517271.X中公開了一種通過(guò)檢測(cè)RNA降解程度判斷法醫(yī)學(xué)中血痕形成時(shí)間的方法。選擇18S rRNA為基礎(chǔ)，分別以44bp的短片段，149bp的中片段以及305bp長(zhǎng)片段為靶序列設(shè)計(jì)引物。運(yùn)用短中長(zhǎng)這三種引物，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)。對(duì)梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行qPCR反應(yīng)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)qPCR擴(kuò)增檢測(cè)得到Ct值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線可以對(duì)起始模版拷貝數(shù)進(jìn)行定量。隨著時(shí)間的增加，長(zhǎng)片段目的序列擴(kuò)增成功的概率最低，中片段次之，短片段相對(duì)穩(wěn)定擴(kuò)增成功概率較高。通過(guò)計(jì)算長(zhǎng)片段與短片段起始拷貝數(shù)的比值以及中片段與短片段起始拷貝數(shù)的比值，判斷人血痕樣本中RNA的完整度。通過(guò)分析RNA完整度與時(shí)間的線性關(guān)系，從而為研究血痕存留時(shí)間、死亡時(shí)間以及損傷時(shí)間等提供技術(shù)手段。

但利用RNA或DNA在體外的降解時(shí)間來(lái)進(jìn)行反向推測(cè)，結(jié)果的精確度僅能達(dá)到“天”的水平，在一定程度上增加了案件難度。

在幾乎所有生物體中都存在24h明暗循環(huán)的生理性節(jié)律。而這一生理性周期主要是由于在外界的長(zhǎng)期影響下，體內(nèi)產(chǎn)生的一系列節(jié)律性變化所形成的。在不同器官和組織中不同的基因以晝夜節(jié)律和特定方式進(jìn)行著變化，并且在很大程度上受動(dòng)態(tài)表觀遺傳和轉(zhuǎn)錄后機(jī)制調(diào)控。microRNA是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，主要參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。因此microRNA在不同時(shí)間的表達(dá)可能與基因的節(jié)律性表達(dá)具有一定的相關(guān)性。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明主要利用microRNA在24h表達(dá)節(jié)律性，更為細(xì)化地推斷血痕的遺留時(shí)間。本發(fā)明主要目的是推斷24h內(nèi)血痕遺留在現(xiàn)場(chǎng)的時(shí)間。

一方面，本發(fā)明提供了一種鑒定血痕遺留時(shí)間的microRNA組合。

所述的microRNA組合包括：hsa-miR106b-5p、hsa-miR155-5p、hsa-miR16-5p、hsa-miR140-5p、hsa-miR423-3p、hsa-miR423-5p、hsa-miR93-5p、hsa-miR222-3p、hsa-miR483-3p、hsa-miR139-5p、hsa-miR142-5P。

所述的microRNA組合中還包括內(nèi)參基因hsa-miR191-5p。

另一方面，本發(fā)明提供了一種鑒定血痕遺留時(shí)間的方法。

通過(guò)檢測(cè)前述的microRNA組合中各個(gè)microRNA的相對(duì)表達(dá)量推測(cè)血痕遺留時(shí)間進(jìn)行鑒定。

所述的方法包括通過(guò)SYBRGreen熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)目標(biāo)分子在樣本中的相對(duì)表達(dá)量。

所述的相對(duì)表達(dá)量使用2^-△△CT法進(jìn)行計(jì)算。