[發(fā)明專利]一種空間鄰近化學(xué)發(fā)光二步法檢測抗體的試劑盒及方法

在審

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• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113325174A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 奚偉紅;奚夢嬌;朱丹丹
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫壹閃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N21/76
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 劉娟

1.一種空間鄰近化學(xué)發(fā)光二步法檢測抗體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

發(fā)光標(biāo)記物、酶標(biāo)記物、生物素標(biāo)記抗原固相包被物、輔助劑、觸發(fā)劑和校準(zhǔn)品；

所述發(fā)光標(biāo)記物原料組分包括9,10-二氫吖啶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白單克隆抗體；

所述酶標(biāo)記物原料組分包括HRP標(biāo)記的親和素/鏈霉親和素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述生物素標(biāo)記抗原固相包被物中生物素標(biāo)記抗原通過如下方法制得：

將待標(biāo)記的抗原用緩沖液稀釋到1-2.5ml，制得抗原溶液，所述緩沖液為0.1mol/L的碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L的硼酸緩沖液；將1mg的NHSB溶解于1ml的DMSO中，制得NHSB溶液；取1ml抗原溶液在其中加入120u1NHSB溶液，室溫下攪拌，保溫2-4小時，再向其中加入9.6μl濃度為1mol/L的NH₄CL，攪拌10分鐘；在4℃，對PBS進行透析，除去游離的生物素；將樣品上1ml的分子篩柱，以PBS緩慢洗脫，收集1ml/管，抗原在1-3m1之間洗下；洗脫液中加入其體積50％的重蒸甘油，置于20℃保存；

所述碳酸氫鈉緩沖液的pH為8.0；所述硼酸緩沖液的pH為8.6。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述生物素標(biāo)記抗原固相包被物中固相載體為磁珠，并且通過如下方法制得：

取0.5ml商品化活性磁珠加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，用PH9.5的0.1mol/L的PB緩沖液，混勻洗滌，重復(fù)操作3次；將生物素標(biāo)記抗原溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時后，用PH7.2的0.1mol/L的PB緩沖液清洗包被磁珠3次，然后用磁珠保存液配置成0.05％的生物素磁分離試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述酶標(biāo)記物的原料組分還包括0.05M磷酸鹽緩沖液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述發(fā)光標(biāo)記物的原料組分還包括0.05M Tris緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述輔助劑的組分包括發(fā)光輔助劑和pH6.0的枸櫞酸鹽緩沖液，所述發(fā)光輔助劑為對羥基苯基丙烯酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述觸發(fā)劑選用0.05M pH8.0Tris-HCl緩沖液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述校準(zhǔn)品包括不同濃度抗體的校準(zhǔn)品和0.1M校準(zhǔn)品稀釋液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述抗原包括但不限于寨卡病毒抗原；

所述生物素標(biāo)記抗原固相包被物中固相載體選自微孔板、試管、樣品杯、塑料微球、纖維素試驗條、紙測試條、塑料試驗條、膠乳粒子、聚合物粒子、二氧化硅粒子以及磁珠中的任意一種。

10.基于權(quán)利要求1～9任一項所述試劑盒二步法檢測抗體的方法，其特征在于，包括步驟：

S1：將校準(zhǔn)品和樣本25μl分別加入裝有25μl生物素標(biāo)記抗原包被固相載體的反應(yīng)管中，震蕩混勻，在37℃下孵育15min；

S2：洗滌：PH7.2的0.1mol/L的PB緩沖液洗滌3次；

S3：在校準(zhǔn)品和樣本反應(yīng)管中分別加入酶標(biāo)記物25μl、發(fā)光標(biāo)記物25μl，震蕩混勻，在37℃條件下孵育10min；

S4：在校準(zhǔn)品和樣本反應(yīng)管中分別加入輔助劑5μl，震蕩混勻，靜置1～2min，再加入觸發(fā)劑75μl，立即檢測，讀取信號；

S5：檢測校準(zhǔn)品和樣本的發(fā)光強度，與CUTOFF值比較，計算出COI，判斷結(jié)果。