[發明專利]檢測番茄環斑病毒的引物組合物、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202110576568.8
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113293232A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 楊倩倩;王道;張蓬軍;俞曉平;劉光富;許益鵬;郝培應
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.檢測或輔助檢測番茄環斑病毒的組合物，其特征在于，所述組合物由引物ToBF1、引物ToBR1、引物ToDR1、引物ToMBR1和引物ToCPF1組成；所述引物ToBF1的核苷酸序列如SEQID No.1所示；所述引物ToBR1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述引物ToDR1的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述引物ToMBR1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述引物ToCPF1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述引物ToDR1的5’端標記FAM，引物ToMBR1的5’端標記生物素。

3.根據權利要求1或2所述的組合物，其特征在于，所述引物ToBF1、引物ToBR1、引物ToDR1、引物ToMBR1和引物ToCPF1的摩爾比為：1：1：3：3：5。

4.檢測或輔助檢測番茄環斑病毒的試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑或試劑盒包含權利要求1-3中任一所述的組合物。

5.檢測或輔助檢測番茄環斑病毒的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

采用權利要求1-3任一所述的組合物或權利要求4所述的試劑或試劑盒對待測樣品進行交叉引物等溫擴增，根據擴增產物確定待測樣品是否含有番茄環斑病毒或是否感染番茄環斑病毒。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述交叉引物等溫擴增中，所述引物ToBF1和引物ToBR1在反應體系中的含量均為0.2μmol/L；所述引物ToDR1和引物ToMBR1在反應體系中的含量均為0.6μmol/L；所述引物ToCPF1在反應體系中的含量為1μmol/L。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述交叉引物等溫擴增為實時熒光交叉引物等溫擴增。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述根據擴增產物確定待測樣品是否含有番茄環斑病毒或是否感染番茄環斑病毒的方法為：根據擴增曲線確定待測樣品是否含有番茄環斑病毒，如果擴增曲線為非S型擴增曲線，確定待測樣品中不含有番茄環斑病毒或沒有感染番茄環斑病毒，確定待測樣品中疑似不含有番茄環斑病毒或疑似沒有感染番茄環斑病毒；如果擴增曲線為S型擴增曲線，確定待測樣品中含有番茄環斑病毒或感染番茄環斑病毒，或確定待測樣品中疑似含有番茄環斑病毒或疑似感染番茄環斑病毒。

9.根據權利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于，所述擴增產物用核酸試紙條檢測，所述根據擴增產物確定待測樣品是否含有番茄環斑病毒或是否感染番茄環斑病毒的方法為：如果所述核酸試紙條出現兩條條帶，一條位于質控區內，一條位于檢測區，確定待測樣品中含有番茄環斑病毒或感染番茄環斑病毒，或確定待測樣品中疑似含有番茄環斑病毒或疑似感染番茄環斑病毒；如果所述核酸試紙條只出現一條條帶，位于質控區內，確定待測樣品中不含有番茄環斑病毒或沒有感染番茄環斑病毒，或確定待測樣品中疑似不含有番茄環斑病毒或疑似沒有感染番茄環斑病毒。

10.權利要求1-3所述的組合物在制備用于番茄環斑病毒的檢測或輔助檢測的產品中的應用，和/或，權利要求4或5所述的試劑或試劑盒在番茄環斑病毒的檢測或輔助檢測中的應用。