[發(fā)明專利]基于DNA納米線的局域催化發(fā)夾自組裝技術檢測外泌體miRNA的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110575085.6
• 申請日: 2021-05-25
• 公開（公告）號: CN113388668A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設計）人: 鄭磊;張曄;羅世華;巫媛;司徒博;張曉荷
• 申請（專利權）人: 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841;C12Q1/682;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 張博

1.一種檢測外泌體miRNA的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針為DNA納米線-CHA熒光探針，包括Trigger、L1、L2及H1、H2序列，所述H1帶有熒光基團和淬滅基團；Trigger、L1、L2、H1、H2變性后，Trigger和L1、L2先通過雜交鏈式反應形成帶有H1、H2連接位點的DNA納米線，H1、H2再連接在DNA納米線上，形成所述DNA納米線-CHA熒光探針；所述Trigger、L1、L2的核苷酸序列選自以下四種組合中的任意一種：

組合一：

Trigger-16：5′-ATTCGGCGTGGGTTAA-3′(SEQ ID NO.1)，

L1-16：5′-TTAACCCACGCCGAATCAAAGTATTCGGCGTGAAAAAGTGAGCACGGACG-3′(SEQ IDNO.2)，

L2-16：5′-GACGTGCAGGCTGTTTAAATTCGGCGTGGGTTAACACGCCGAATACTTTG-3′(SEQ IDNO.3)；

組合二：

Trigger-24：5′-AGTCTAGGATTCGGCGTGAGTTAA-3′(SEQ ID NO.4)，

L1-24：5′-TTAACTCACGCCGAATCCTAGACTCAAAGTAGTCTAGGATTCGGCGTGGTGAGCACGGACGAAA-3′(SEQ ID NO.5)，

L2-24：5′-AGTCTAGGArTCGGCGTGAGTTAACACGCCGAArCCTAGACTACTTTGGACGTGCAGGCTGTTA-3′(SEQ ID NO.6)；

組合三：

Trigger-32：5′-AGTCTAGGATTCGTAGCGTGTTGCTTATTGTG-3′(SEQ ID NO.7)，

L1-32：5′-GACAATAAGCAACACGCTACGAATCCTAGACTGACACTAAGTAGTCTAGGATTCGTAGCGTGTTAAAGTGAGCACGGACG-3′(SEQ ID NO.8)，

L2-32：5′-GACGTGCAGGCTGATAAGTCTAGGATTCGTAGCGTGTTGCTTATTGTGAACACGCTACGAATCCTAGACTACTTAGTGTC-3′(SEQ ID NO.9)；

組合四：

Trigger-40：5′-AGTCTAGGATTCGTAGCGTGTTGCTTATTGTG-3′(SEQ ID NO.10)，

L1-40：5′-GACAATAAGCAACACGCTACGAATCCTAGACTTTTTTTTTGACACTAAGTAGTCTAGGATTCGTAGCGTGTTAAAGTGAGCACGGACG-3′(SEQ ID NO.11)，

L2-40：5′-GACGTGCAGGCTGATAAGTCTAGGATTCGTAGCGTGTTGCTTATTGTCTTTTTTTTAACACGCTACGAATCCTAGACTACTTAGTGTC-3′(SEQ ID NO.12)；

所述H1、H2的核苷酸序列選自以下四種組合中的任意一種：

組合A：

H1-1246：5′-CCTGCTCCAAAAATCCATTGATGTACTAGGAATGGATTTTTGCCCACACGTCAAACCTT-3′(SEQ ID NO.14)，

H2-1246：5′-TCCATTCCTAGTACATCAATGGATTTTTGGATGTACTAGGTCCTCTCCTGCTACACA-3′(SEQ ID NO.15)；

組合B：

H1-375：5′-TTCGGCTCGCGTGAGATGTACTAGGTCACGCGAGCCGAACGAACAAATTTCCACACGTCAAACCTT-3′(SEQ ID NO.18)，

H2-375：5′-CTACTCAGATGTACTAGGTTCGGCTCGCGTGACCTAGTACATCTCACGCGTTTCCTCTCCTGCTACACA-3′(SEQ ID NO.19)；

組合C：

H1-221：5′-TGTCTGCTGGGTTTCGATGTACTAGGGAAACCCAGCAGACAATGTAGCTTTTCCACACGTCAAACCTT-3′(SEQ ID NO.22)，

H2-221：5′-CTACTCAGATGTACTAGGTGTCTGCTGGGTTTCCCTAGTACATCGAAACCCACCTCTCCTGCTACACA-3′(SEQ ID NO.23)；

組合D：

H1-21：5′-TCAGACTGATGTTGAGATGTACTAGGTCAACATCAGTCTGATAAGCTATTTCCACACGTCAAACCTT-3′(SEQ ID NO.26)，

H2-21：5′-CTACTCAGATGTACTAGGTCAGACTGATGTTGACCTAGTACATCTCAACATTTCCTCTCCTGCTACACA-3′(SEQ ID NO.27)。