[發明專利]一種肝細胞凍存液及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110561580.1
• 申請日: 2021-05-22
• 公開（公告）號: CN113383768B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 閔婭蘭;周平;王軍;劉路;鄭飛;王依林
• 申請（專利權）人: 武漢仝干醫療科技股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

本發明一種肝細胞凍存液及其制備方法和應用，所述凍存液包括以下組分：二甲基亞砜、葡萄糖、人重組白蛋白、維生素C、維生素E、羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液、細胞緩沖液和氨基酸混合液。該凍存液避免了胎牛血清的使用，減少了對細胞治療的不良影響，且成本低、成分穩定，制備方法簡單，可規模化生產。

技術領域

本發明涉及細胞凍存液技術領域，特別涉及一種肝細胞凍存液及其制備方法和應用。

背景技術

細胞治療是指利用具有某些特定功能的細胞，采用生物工程方法通過體外擴增、特殊培養等處理后，使這些細胞具有增強免疫、殺死病原體和腫瘤細胞、促進組織器官再生和機體康復等治療功效，從而達到治療疾病的目的。其技術發展使得腫瘤，白血病等疾病的治療的疾病有了新的方法。

其中L-02細胞建系鑒定于1980年(葉秀珍等，1980)。該細胞是一株正常肝細胞系，具有典型的肝細胞形態學特征，其細胞功能與正常肝細胞相似，是肝病細胞治療中的種子細胞。L-02細胞通過細胞治療技術在肝病治療中可以發揮重要輔助作用。

目前，肝細胞凍存液中均含有胎牛血清。但是，由于細胞治療中細胞與人體有接觸，而胎牛血清在其中有不確定因素，可能會影響細胞治療效果。即使離心除去凍存液，也不能完全去除胎牛血清中的影響，會在一定程度上影響后續細胞治療的效果。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種肝細胞凍存液，該凍存液不含有胎牛血清，能進一步減少肝細胞治療在臨床上的不安全因素，同時還能維持肝細胞的細胞存活率和生物活性。

為了實現上述目的，本發明的技術方案具體如下：

一種肝細胞凍存液，包括以下組分：體積分數5％～10％的二甲基亞砜，體積分數為10～15％的羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液，0.5～2.0g/L的葡萄糖，35～50g/L的人重組白蛋白，30～120μmol/L的維生素C，10～50μmol/L的維生素E，以及余量的混合溶液，所述混合溶液中細胞緩沖液與氨基酸混合液的體積比1:1～2。

優選的，所述細胞緩沖液的組分為：6800～8000mg/L NaCl、300～400g/L KCl、140～200mg/L CaCl₂、95～100mg/L無水MgSO₂、100～130mg/L Na₂HPO₄、40～55mg/L KH₂PO₄以及余量無菌水，所述細胞緩沖液的pH為7.1～7.6且其滲透壓為250～290mOsm/L。

優選的，所述氨基酸混合液中含有：5～7.5mg/L甘氨酸、7～9mg/L L-丙氨酸、40～50mg/L L-纈氨酸、45～55mg/L L-亮氨酸、45～55mg/L L-異亮氨酸、25～35mg/LL-苯丙氨酸、8～13mg/L L-脯氨酸、8～13mg/L L-色氨酸、8～13mg/L L-絲氨酸、30～40mg/L L-絡氨酸、12～20mg/L L-蛋氨酸、280～300mg/L L-谷氨酰胺、25～35mg/L L-胱氨酸、12～15mg/LL-天冬酰胺、120～130mg/L L-精氨酸、70～75mg/L L-賴氨酸、40～45mg/L L-組氨酸、12～15mg/L L-天門冬氨酸、13～15mg/L L-谷氨酸、0.5～1.8g/L亞硫酸氫鈉、11～15g/L山梨醇，所述氨基酸混合液的溶劑為無菌水。

本發明還提供了制備上述肝細胞凍存液的方法，具體包括以下步驟：

S1、將細胞緩沖液中的各組分原料溶于無菌水中，攪拌混勻，調節pH至7.1～7.6，滅菌得到細胞緩沖液；

S2、取各類氨基酸和亞硫酸氫鈉溶于含有山梨醇的無菌水溶液中，攪拌均勻即得氨基酸混合液；