[發明專利]一種肝細胞凍存液及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110561580.1
• 申請日: 2021-05-22
• 公開（公告）號: CN113383768B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 閔婭蘭;周平;王軍;劉路;鄭飛;王依林
• 申請（專利權）人: 武漢仝干醫療科技股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

1.一種肝細胞凍存液，其特征在于，所述凍存液包括：體積分數5％～10％的二甲基亞砜，體積分數為10～15％的羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液，0.5～2.0g/L的葡萄糖，35～50g/L的人重組白蛋白，30～120μmol/L的維生素C，10～50μmol/L的維生素E，以及余量的混合溶液，所述混合溶液中細胞緩沖液與氨基酸混合液的體積比1:1～2；

所述細胞緩沖液的組分為：6800～8000mg/L NaCl、300～400g/L KCl、140～200mg/LCaCl₂、95～100mg/L無水MgSO₂、100～130mg/L Na₂HPO₄、40～55mg/L KH₂PO₄以及余量無菌水，所述細胞緩沖液的pH為7.1～7.6且其滲透壓為250～290mOsm/L；

所述氨基酸混合液中含有：5～7.5mg/L甘氨酸、7～9mg/L L-丙氨酸、40～50mg/L L-纈氨酸、45～55mg/L L-亮氨酸、45～55mg/L L-異亮氨酸、25～35mg/L L-苯丙氨酸、8～13mg/L L-脯氨酸、8～13mg/L L-色氨酸、8～13mg/L L-絲氨酸、30～40mg/L L-絡氨酸、12～20mg/L L-蛋氨酸、280～300mg/L L-谷氨酰胺、25～35mg/L L-胱氨酸、12～15mg/L L-天冬酰胺、120～130mg/L L-精氨酸、70～75mg/L L-賴氨酸、40～45mg/L L-組氨酸、12～15mg/LL-天門冬氨酸、13～15mg/L L-谷氨酸、0.5～1.8g/L亞硫酸氫鈉、11～15g/L山梨醇，所述氨基酸混合液的溶劑為無菌水。

2.一種制備權利要求1所述肝細胞凍存液的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將細胞緩沖液中的各組分原料溶于無菌水中，攪拌混勻，調節pH至7.1～7.6，滅菌得到細胞緩沖液；

S2、取各類氨基酸和亞硫酸氫鈉溶于含有山梨醇的無菌水溶液中，攪拌均勻即得氨基酸混合液；

S3、將步驟S1所述細胞緩沖液與步驟S2所述氨基酸混合液按比例混合，攪拌均勻后，加入葡萄糖、人重組白蛋白、維生素C、維生素E、羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液，攪拌混勻后使其滲透壓為250～290mOsm/L，除菌，再與二甲基亞砜混合即得肝細胞凍存液。

3.權利要求1所述肝細胞凍存液在凍存肝細胞中的應用，其特征在于，所述每1mL凍存液中保存的肝細胞數量為1～1.5×10⁷個。