[發明專利]一種中國對蝦雌性特異性引物及其應用

在審

• 申請號: 202110555289.3
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113151430A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 王瓊;何玉英;任憲云;呂建建;王佳佳;劉萍;李健
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明公開了一種中國對蝦雌性特異性引物及其應用。所述雌性特異性引物的序列為：Female?specific?F：5’?GTTTCACCTACGCTTCACCC?3’；Female?specific?R：5’?TCCTTAATCCTGCTGCATCCA?3’。利用該引物對待測對蝦的基因組DNA進行PCR擴增，其產物電泳結果若出現210 bp和392 bp兩條條帶時判定為雌性中國對蝦，若只出現392 bp條帶時判定為雄性中國對蝦。本發明還同時利用設計的對照引物來避免由模板出現問題而造成的鑒定結果誤判，提高準確性。本發明的特異性引物特異性強，鑒定方法簡單快速準確，尤其適合中國對蝦早期遺傳性別鑒定。

技術領域

本發明屬于海洋蝦類性別鑒定技術，具體涉及一種中國對蝦雌性特異性引物及其應用。

背景技術

中國對蝦(Fenneropenaeus chinensis)屬節肢動物門(Arthropoda)、甲殼 綱(Crustacea)、十足目(Decapoda)、對蝦科(Penaeidae)，又稱東方對蝦， 俗稱對蝦、明蝦，主要分布于黃渤海以及東海北部的嵊泗列島和舟山群島一帶， 是我國最具代表性的海水經濟養殖動物之一，并在國際市場上享有較高的聲譽。 中國對蝦屬廣溫、廣鹽性、一年生暖水性大型洄游蝦類，在黃、渤海區有明顯的 洄游習性，分為越冬洄游和生殖洄游，其產卵期在4～6月間，懷卵量30～100萬 粒。近年來中國對蝦的年養殖產量穩定在4-5萬噸，養殖區域主要分布在長江以 北的江蘇、山東、天津、河北和遼寧等黃渤海沿岸地區。

目前，中國對蝦主要通過外觀辨別雌雄。性成熟的雌蝦體長在18cm~23cm，體重60g~80g，呈青綠色；成熟的雄蝦體長在13cm~17cm，體重30g~40g，呈黃褐色；雌蝦平均體重比雄蝦重一倍以上，因而其市場價值也大大高于雄性個體。并且中國對蝦上市規格、等級的不同，也會極大地影響養殖經濟效益。因此，建立中國對蝦單性育種和養殖技術，將有助于提高養殖產量，增加漁民收入。但是，中國對蝦幼蝦特別是發育早期的幼體很難通過外觀辨別雌雄，也尚無通過分子技術對中國對蝦進行性別鑒定的方法，這極大阻礙了其單性育種和養殖產業的發展。

發明內容

本發明提供了一種中國對蝦雌性特異性引物及其應用。所述的中國對蝦雌性特異性引物能夠大規模快速準確地鑒定生長發育早期中國對蝦的遺傳性別。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了一種中國對蝦雌性特異性引物，其核苷酸序列為：

Female-specific-F：5’-GTTTCACCTACGCTTCACCC-3’；

Female-specific-R：5’-TCCTTAATCCTGCTGCATCCA-3’。

本發明還提供了一種中國對蝦遺傳性別特異性鑒定方法，包括以下步驟：

（1）提取待鑒定的中國對蝦個體的基因組DNA；

所述基因組DNA的提取方法為：采集中國對蝦的肌肉組織或者幼體期的整個個體，在裂解液中進行勻漿，加入蛋白酶K，并于在55℃水浴鍋中消化組織至澄清，再利用酚-氯仿抽提法或者試劑盒提取DNA，測定DNA濃度后稀釋至100 ng/μL，于-20℃冰箱中保存備用；

（2）以步驟（1）提取的基因組DNA作為模板，利用所述的中國對蝦雌性特異性引物進行PCR擴增，得到PCR產物；

（3）利用凝膠電泳檢測步驟（2）的PCR產物，并觀察電泳結果；若電泳結果出現兩條條帶，條帶的大小分別為392bp和210bp，則中國對蝦鑒定為雌性，若電泳結果僅出現一條大小為392bp的條帶，則中國對蝦鑒定為雄性。

進一步的，大小為392bp的條帶為擴增條帶，大小為210bp的條帶為特異性擴增條帶。

進一步的，所述步驟（2）中為了避免由模板出現問題而造成的鑒定結果誤判，同時利用對照引物對基因組DNA進行PCR擴增，以此判斷中國對蝦遺傳性別鑒定過程中的模板是否存在問題。