[發(fā)明專(zhuān)利]一株烈性沙門(mén)氏菌噬菌體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110540931.0
• 申請(qǐng)日: 2021-05-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113583966B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜新永;馬如霞;楊為強(qiáng);李先勝;崔耐;王立坤;王曉鈴
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 瑞科盟（青島）生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00;A23L33/10;A23K10/18;A61K35/76;A61P31/04;A01N63/40;A01P1/00
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 夏靜潔

本發(fā)明公開(kāi)了一株烈性沙門(mén)氏菌噬菌體，保藏編號(hào)為CGMCC No.21996，對(duì)全基因進(jìn)行測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，不具有毒力基因和溶原性基因；該沙門(mén)氏菌噬菌體RDP?SA?20051在80℃高溫條件下作用30min，效價(jià)保持在1.0×10⁸pfu/mL以上，具有良好的耐高溫特性；該噬菌體在pH在5?9范圍作用6小時(shí)，其效價(jià)保持在1×10¹⁰pfu/mL之上，在pH＝12以及pH＝2時(shí)，仍有噬菌體存活，該噬菌體的酸堿耐受范圍較寬；裂解譜廣，可裂解不同血清型的沙門(mén)氏菌，裂解率達(dá)98.9％，具有更強(qiáng)的裂解性能，在治療沙門(mén)氏菌感染疾病具有很好的優(yōu)勢(shì)，效價(jià)高，防治效果好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一株烈性沙門(mén)氏菌噬菌體及其在禽類(lèi)動(dòng)物致病性沙門(mén)氏菌感染中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

沙門(mén)氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一,是一種常見(jiàn)的食源性致病菌。雞是沙門(mén)氏菌最重要的宿主，沙門(mén)氏菌可引起雞急性或慢性疾病，感染沙門(mén)氏菌的雞也可通過(guò)產(chǎn)出帶菌的蛋導(dǎo)致沙門(mén)菌的垂直傳播，從而形成惡性循環(huán)。當(dāng)雞群暴發(fā)沙門(mén)氏菌病時(shí)死亡率可達(dá)80％，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。人一旦攝入了含有大量沙門(mén)氏菌的動(dòng)物性食品，可導(dǎo)致食源性中毒，據(jù)統(tǒng)計(jì)在世界各國(guó)的種類(lèi)細(xì)菌性食物中毒中，沙門(mén)氏菌引起的食物中毒常列榜首?？股匾恢币詠?lái)被作為治療細(xì)菌感染的首選而得到廣泛應(yīng)用。但隨著抗生素的廣泛使用甚至濫用，目前細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性問(wèn)題已十分嚴(yán)重，抗生素耐藥性正在對(duì)全球健康構(gòu)成威脅。

噬菌體(Bacteriophage或Phage)是自然界中最豐富的生物之一，在地球上大約蘊(yùn)藏著10³¹的噬菌體顆粒，也就是平均每1g土壤或水中包含了多達(dá)10⁸數(shù)量的噬菌體。長(zhǎng)期以來(lái)，其一直被認(rèn)為可作為治療藥物和殺菌劑使用。噬菌體對(duì)某些細(xì)菌菌株具有高度特異性，其取決于噬菌體吸附器官和受體菌表面受體的分子結(jié)構(gòu)和互補(bǔ)性，不會(huì)影響生物體或內(nèi)源性組織的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。另外，即使隨著細(xì)菌耐藥性的發(fā)展，噬菌體仍會(huì)大量保持。在過(guò)去幾年中，使用噬菌體來(lái)檢測(cè)和控制食品和環(huán)境中致病菌及腐敗菌的生長(zhǎng)受到越來(lái)越多研究者的關(guān)注，并且該方法已有許多研究支持。Bmvko LYu等討論了噬菌體檢測(cè)致病菌的優(yōu)缺點(diǎn)，指出利用噬菌體檢測(cè)食品安全及加工制造過(guò)程等方面存在的致病菌具有極大的應(yīng)用前景。例如在蜜瓜切片、雞胸肉、白菜、牛奶、雞皮、豆芽菜等食品中發(fā)現(xiàn)使用噬菌體制劑后沙門(mén)氏菌菌量顯著減少。另外，已從多種食物如碎牛肉、豬肉等肉制品、奶制品、生菜等分離出沙門(mén)氏菌噬菌體，因此，噬菌體是食品中的天然微生物。本試驗(yàn)從現(xiàn)代化肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)病雞體內(nèi)采集樣品，篩選能裂解多株病原菌的沙門(mén)氏菌烈性噬菌體，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行分析，以期為噬菌體防治沙門(mén)氏菌的研究提供理論依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一株烈性沙門(mén)氏菌噬菌體RDP-SA-20051，旨在解決養(yǎng)殖場(chǎng)禽類(lèi)因感染沙門(mén)氏菌，發(fā)病急而治療不及時(shí)，且因致病菌耐藥性而導(dǎo)致用藥無(wú)效等問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一株烈性沙門(mén)氏菌噬菌體RDP-SA-20051，透過(guò)電鏡觀察，頭部呈正六邊形，頭部直徑約為52nm，尾部長(zhǎng)度為110nm，為長(zhǎng)尾科噬菌體，經(jīng)測(cè)定，該沙門(mén)氏菌噬菌體RDP-SA-20051不具有毒力基因和溶原基因，該噬菌體于2021年03月25日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)CGMCCNo.21996。

進(jìn)一步地，該沙門(mén)氏菌噬菌體RDP-SA-20051在80℃高溫條件下作用30min，效價(jià)保持在1.0×10⁸pfu/mL以上，具有良好的耐高溫特性；該噬菌體在pH在5-9范圍作用6小時(shí)，其效價(jià)保持在1×10¹⁰pfu/mL之上，具有明顯的嗜堿性；在pH＝12以及pH＝2時(shí)，仍有噬菌體存活，該噬菌體的酸堿耐受范圍較寬。

進(jìn)一步地，該沙門(mén)氏菌噬菌體RDP-SA-20051具有廣譜的殺滅沙門(mén)氏菌的能力。