[發明專利]一種用于檢測血清中PF4含量的抗體對及其用途

在審

• 申請號: 202110507009.1
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113150142A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 劉靜;劉繼來;程勇;王征
• 申請（專利權）人: 廊坊天光生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;G01N33/68;C12N15/13
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 韓亞偉

本申請提供一種用于檢測血清中PF4含量的抗體對及其用途，包括與PF4的N端表位即SEQIDNO:2所示氨基酸序列相結合的單克隆抗體AntiPF4_N和與PF4的C端表位即SEQIDNO:3所示氨基酸序列相結合的單克隆抗體AntiPF4_C，所述單克隆抗體AntiPF4_N包括SEQIDNO:7所示氨基酸序列的輕鏈可變區和SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重鏈可變區，所述AntiPF4_C包括SEQIDNO:17所示氨基酸序列的輕鏈可變區和SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重鏈可變區。本申請將PF4抗原分成N端(SEQIDNO:2)和C端(SEQIDNO:3)兩段序列，并用這兩段序列分別免疫小鼠，篩選到高特異性和高靈敏性的抗體對AntiPF4_N和AntiPF4_C，通過該抗體對可以有效的測定肝素使用后血清中PF4的含量，進而便于指導肝素的使用。

技術領域

本申請涉及醫藥領域，尤其涉及一種用于檢測血清中PF4含量的抗體對及其用途。

背景技術

肝素是治療和預防血栓性疾病的常用藥物,在腎臟內科廣泛應用于血液透析治療。隨著肝素在臨床上的廣泛應用,其所引起的不良反應亦日益引起人們的重視,主要包括肝素抵抗、出血、血栓形成和過敏反應,其中肝素誘導的血小板減少癥(heparininducedthrom-bocytopenia,HIT)是較為嚴重并發癥之一。HIT是由肝素類藥物引起的一種以血小板減少為特征的并發癥,多發于患者接受肝素治療后的5～10d,其發生的原因是患者體內產生了針對血小板因子4(plateletfactor4,PF4)和肝素(heparin)形成的復合物的抗體(H-PF4抗體)[WARKENTINTE,CHONGBH,GREINACHERA.Heparin-inducedthrombocytopenia：towardconsensus[J].ThrombHaem-ost,1998,79：1-7.]。有研究顯示,H-PF4抗體與動靜脈血栓的發生有關,血液透析患者長期應用肝素進行抗凝治療,處于形成H-PF4抗體的危險中[PENADELAVEGAL,MILLERRS,BENDAMM,etal.As-sociationofheparin-dependentantibodiesandadverseoutcomesInhemodialysispatients：apopulation-basedstudy[J].Mayo ClinProc,2005,80(8):995-1000.]。肝素是當前血液透析中常用的抗凝劑,其不良反應主要是由于體內產生了H-PF4抗體,該抗體的出現對患者透析過程中血小板下降、血栓栓塞并發癥以及心腦血管事件的發生具有提示作用,并對指導透析患者肝素的合理應用和判斷透析患者的遠期預后具有一定的臨床價值。然而，截止目前，還沒有針對PF4臨床檢測的配對抗體序列報道。

發明內容

本申請為解決上述技術問題而提供一種用于檢測血清中PF4含量的抗體對及其用途。

本申請所采取的技術方案是：本申請第一方面提供一種用于檢測血清中PF4含量的抗體對，其特征在于：包括與PF4的N端表位即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列相結合的單克隆抗體AntiPF4_N和與PF4的C端表位即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列相結合的單克隆抗體AntiPF4_C，所述單克隆抗體AntiPF4_N包括SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的輕鏈可變區和SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的重鏈可變區，所述AntiPF4_C包括SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的輕鏈可變區和SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的重鏈可變區。

進一步的，所述單克隆抗體AntiPF4_N輕鏈氨基酸序列包括SEQ ID NO:4所示的LCDR1或與其至少90％同源的氨基酸序列，SEQ ID NO:5所示的LCDR2或與其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:6所示的LCDR3或與其至少90％同源的氨基酸序列；所述單克隆抗體AntiPF4_N重鏈氨基酸序列包括SEQ ID NO:8所示的HCDR1或與其至少90％同源的氨基酸序列，SEQ ID NO:9所示的HCDR2或與其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQ IDNO:10所示的HCDR3或與其至少90％同源的氨基酸序列。