[發明專利]釀酒酵母工程菌及其在制備原兒茶酸中的應用

有效

• 申請號: 202110494864.3
• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN113201466B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 元英進;李炳志;張仁寬
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12P7/42;C12R1/865
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王歡

1.釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述釀酒酵母工程菌以釀酒酵母菌株為底盤菌株，并進行如下改造：

a1）轉入外源基因4CL、ppech、vdh、vanA、vanB、ligM和metf1；且

b1）過表達內源基因MET6; 敲除MHT1和SAM4；

或進行如下改造：

a2）轉入外源基因metf1和ligM；且

b2）過表達內源基因MET6; 且

c2）敲除內源基因MHT1和SAM4；

或進行如下a3）的改造、a3）~b3）的改造、或a3）~c3）的改造：

a3）轉入外源基因ligM；

b3）過表達內源基因MET6;

c3）敲除內源基因MHT1，或敲除MHT1和SAM4；

所述外源基因中，4CL基因來源于歐芹； ECH來源于惡臭假單胞菌； vdh、vanA、vanB基因來源于惡臭假單胞菌； metf1基因來源于Rhizorhabdus dicambivorans Ndbn-20菌株或鞘氨醇單胞菌，ligM基因來源于鞘氨醇單胞菌；所述釀酒酵母菌株的ADH6、ADH7、 BDH2基因被敲除。

2.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述底盤菌株的出發菌株為釀酒酵母菌株BY4742。

3.根據權利要求1或2所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述內源基因、外源基因中每個基因的5’端連接啟動子，3’端連接終止子。

4.根據權利要求3所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述啟動子為釀酒酵母內源啟動子P_TPI1P、P _FBA1、P_ENO2、P _GPM1、P _TDH3、P_ACT1或P_TEF1。

5.權利要求1~4任一項所述的釀酒酵母工程菌在制備原兒茶酸中的應用。

6.權利要求1~4任一項所述的釀酒酵母工程菌的構建方法，包括：

構建啟動子-外源基因/內源基因-終止子的表達模塊，將所述表達模塊與線性化的骨架載體轉化底盤菌株。

7.根據權利要求6所述的構建方法，其特征在于，所述骨架載體為pRS415。

8.一種原兒茶酸的制備方法，其特征在于，利用權利要求1~4任一項所述的酵母工程菌進行發酵。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述發酵的培養基包含阿魏酸、香草酸或木質素水解液。