[發明專利]牛體外受精胚胎培養和凍存的方法

有效

• 申請號: 202110493547.X
• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN112980778B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 王娜;王小武;韓勇權;郝少強;趙明禮;郭春明;許曉椿
• 申請（專利權）人: 天津博裕力牧科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及牛體外受精胚胎培養和凍存的方法，其包括如下步驟：將成熟的卵丘?卵母細胞復合體在受精培養液中洗滌，再轉移到受精培養液中，放入培養箱中，備用；從液氮中取凍精細管，解凍后取精子懸液進行精子計數；將精子懸液加入盛有卵母細胞的受精培養液滴中使精卵共孵育，完成體外受精操作，將胚胎周圍的顆粒細胞用剝卵針去除干凈，放入胚胎培養液中培養，接著將可用胚胎轉移入冷凍液，置入液氮中冷凍保存；在需要使用冷凍保存的胚胎時，從液氮中取出細管，移入解凍液中，將胚胎放入胚胎培養液小滴內培養，完成解凍過程。本發明還涉及所用的冷凍液和解凍液。本發明方法能夠顯著提高牛體外受精胚胎凍存和解凍后的存活率。

技術領域

本發明屬于動物繁殖技術領域，涉及一種用于農業-畜牧獸醫繁殖的技術，具體涉及一種牛體外受精的方法，另外，本發明還涉及牛體外受精中使用的相關工作試液在牛體外受精中的應用，尤其是，涉及一種牛體外受精的方法，例如涉及一種具有優良效果的牛體外受精囊胚凍存和解凍的方法。本發明牛體外受精的方法具有優異的技術效果。

背景技術

體外受精(In Vitro Fertilization)或(external fertilization)是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環境中完成受精過程的技術，英文簡稱為IVF。由于它與胚胎移植技術(ET)密不可分，又簡稱為IVF-ET。在生物學中，把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動物稱試管動物(test-tube animal)。這項技術成功于20世紀50年代，在最近20年發展迅速，現已日趨成熟而成為一項重要而常規的動物繁殖生物技術。

體外受精技術對動物生殖機理研究、畜牧生產、醫學和瀕危動物保護等具有重要意義。如用小鼠、大鼠或家兔等作實驗材料，體外受精技術可用于研究哺乳動物配子發生、受精和胚胎早期發育機理。在家畜品種改良中，體外受精技術為胚胎生產提供了廉價而高效的手段，對充分利用優良品種資源，縮短家畜繁殖周期，加快品種改良速度等有重要價值。在人類，IVF-ET技術是治療某些不孕癥和克服性連鎖病的重要措施之一。體外受精技術還是哺乳動物胚胎移植、克隆、轉基因和性別控制等現代生物技術不可缺少的組成部分。

隨著現代農業科技的發展，為了更充分利用良種母牛的繁殖潛力，加速遺傳育種進程，在生產實踐中應用高效的繁殖新技術成為必然。活體采卵(Ovum pick UP，OPU)和體外受精技術(In Vitro Fertilization，IVF)是二十世紀八十年代快速發展起來的胚胎工程新技術，二者相結合可獲得大量遺傳系譜明確的胚胎，從而縮短世代間隔。目前，這兩種技術已經成為歐美和大洋洲等畜牧業發達國家的農場主為擴大良種母牛群而采用的重要繁殖技術。然而，采用常規的牛胚胎培養體系(CR1aa和SOF液)，牛體外受精的囊胚發育率較低，而且胚胎質量也遠不及體內胚胎，導致胚胎移植受體后的妊娠率低，因此如何提高囊胚發育率及胚胎質量成為體外受精胚胎生產的重點和研究的焦點。

早在1878年，德國人Scnenk就以家兔和豚鼠為材料，開始探索哺乳動物的體外受精技術。但直到1951年，美籍華人張民覺和Austin分別發現精子體外獲能現象后，體外受精技術才獲得了突破性進展。牛體外受精技術受到卵母細胞的體外成熟、精子的體外獲能、受精卵的體外培養環境等多個方面的影響。