[發(fā)明專利]一種RNA文庫的構(gòu)建方法及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110490894.7
• 申請(qǐng)日: 2021-05-06
• 公開（公告）號(hào): CN113201793A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方圓;蔡青青;宋澤世
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 探因醫(yī)學(xué)科技（浙江）有限公司
• 主分類號(hào): C40B50/06
• 分類號(hào): C40B50/06;C12Q1/6806
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種RNA文庫的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用第一引物逆轉(zhuǎn)錄RNA，得到第一鏈cDNA，所述第一引物包括第一接頭序列和隨機(jī)序列；

純化所述第一鏈cDNA；

采用第二引物擴(kuò)增所述第一鏈cDNA，生成二鏈DNA，所述第二引物包括第二接頭序列和隨機(jī)序列；

采用第三引物擴(kuò)增所述二鏈DNA得到RNA文庫。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述第二引物擴(kuò)增所述第一鏈cDNA時(shí)采用的DNA聚合酶為具有鏈置換功能的DNA聚合酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述第一接頭序列為ACGCTCTTCCGATCT。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述第二接頭序列為CGTATGCCGTCTTCTGCTTG。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述第三引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物從5’端至3’端依次包括：上游測(cè)序平臺(tái)序列、第一文庫標(biāo)簽序列以及上游測(cè)序引物序列，所述下游引物從5’端至3’端依次包括：下游測(cè)序平臺(tái)序列、第二文庫標(biāo)簽序列以及下游測(cè)序引物序列，其中，所述下游測(cè)序引物序列與所述第一引物的5’端的至少部分序列相同，所述上游測(cè)序引物序列與所述第二引物的5’端的至少部分序列相同。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述第三引物序列為：

上游引物：

GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXXXXATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG；

下游引物：

AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC，

其中XXXXXXXX為index序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述純化為磁珠純化。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述RNA為總RNA、mRNA、lncRNA或去除核糖體的RNA。

9.一種試劑盒，其特征在于，包括根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的第一引物、第二引物和第三引物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶。