[發明專利]一種用于檢測浸潤性乳腺癌中EphA2 DNA甲基化的方法及用途

在審

• 申請號: 202110480294.2
• 申請日: 2021-04-30
• 公開（公告）號: CN113151473A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 馬勝超;吳立剛;姜怡鄧;納麗;高源;張晴;劉坤;揭育禎;丁寧
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體公開了一種用于檢測浸潤性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法，具體通過提取組織全基因組DNA，并甲基化修飾全基因組DNA，然后利用一對外引物和兩對內引物進行nMS?PCR擴增檢測。本發明中檢測浸潤性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法能夠檢測到組織中EphA2DNA甲基化的水平，從而判斷浸潤性乳腺癌的發病情況。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及一種用于檢測浸潤性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法及用途。

背景技術

乳腺癌作為女性患癌率最高的惡性腫瘤之一，目前全球診斷的乳腺癌患者約1700萬人，每年有100萬左右的人死于該病。研究發現炎癥反應參與了乳腺癌疾病的發生發展，在乳腺疾病的早期乳腺小體會發生炎癥改變，但具體機制尚不清楚。乳腺癌是包括肺癌和結腸癌在內的最常見三大癌癥之一，近些年隨著我國臨床篩查水平的提高和人們生活水平的改變，乳腺癌的發病率呈逐年上升趨勢。雖然現在可以通過二代基因測序分析腫瘤標志物和病理活檢篩查早期乳腺癌，但是由于乳腺癌的分型復雜、癥狀多樣和預后較差，目前尚無積極有效的乳腺癌治療方法。在乳腺結節形成過程中，炎癥反應扮演了重要角色；研究發現在早期乳腺疾病發生前，乳腺結節會首先發生炎癥改變，最終導致乳腺癌的發生。

促紅素人肝細胞受體酪氨酸激酶A2(EphA2)是一種廣泛表達在腫瘤細胞上的跨膜蛋白，主要作用于細胞生長、炎癥細胞轉移、細胞排斥和粘附等信號傳導方面。哺乳動物的Ephrin受體根據其跨模結構域分為A類和B類，包括9個EphA(EphA1-8和EphA10)和五個EphB受體(EphB1-4和EphB6)。其中EphA2是最初是在1990年被發現的由976個氨基酸組成的跨膜糖蛋白；正常條件下，EphA2可以與鄰近細胞上的ephrin A1配體相互作用，調節炎癥反應和內皮細胞活化。越來越多的證據表明EphA2在食道癌、乳腺癌、肺癌和卵巢癌等腫瘤的惡化和進展中發揮作用。檢測患者乳腺組織中EphA2表達，可以幫助我們分析和診斷乳腺癌的進展和病理類型。但是僅僅通過檢測EphA2的表達還不能準確的診斷浸潤性乳腺癌的病況，也無法分析EphA2在浸潤性乳腺癌中的具體作用。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種用于檢測浸潤性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法，。

本發明提供了一種用于檢測浸潤性乳腺癌中EphA2 DNA甲基化的方法，包括：提取待檢測組織的全基因組DNA，并甲基化修飾全基因組DNA，先利用一對外引物進行nMS-PCR擴增，然后以獲得的產物作為模板，分別利用兩對內引物進行擴增，通過計算獲得甲基化水平。

進一步地，一對外引物的上游引物如SEQ ID NO.1所示，下游引物如SEQ ID NO.2所示。

進一步地，兩對內引物包括甲基化引物和非甲基化引物；

所述甲基化引物的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，甲基化引物的下游引物序列如SEQ ID NO.4所示；

所述非甲基化引物的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示，非甲基化引物的下游引物序列如SEQ ID NO.6所示。

進一步地，所述甲基化水平的計算方式為：

甲基化水平＝甲基化OD值/(甲基化OD值+非甲基化OD值)。

本發明還提供了所述的EphA2基因在制備治療乳腺癌藥物中的用途。

本發明還提供了所述的EphA2基因的表達產物在制備治療乳腺癌藥物中的用途。

進一步地，所述乳腺癌為浸潤性乳腺癌。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：