[發明專利]金針菇中β-煙酰胺單核苷酸的毛細管電泳測定方法

有效

• 申請號: 202110475604.1
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113189185B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 肖軍;馬曉穎;肇瑩;陳珣;肖健
• 申請（專利權）人: 遼寧省農業科學院
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/44
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 馬維駿

本發明涉及成分分析技術領域，具體涉及金針菇中β?煙酰胺單核苷酸的毛細管電泳測定方法。本發明的測定方法的建立基于對以下條件的篩選和考察研究：樣品提取方法、緩沖液種類、緩沖液pH值、操作電壓、測定波長、進樣時間以及活性劑的添加種類等重要的電泳條件技術參數，高效毛細管電泳運行過程中不需要有機溶劑，緩沖液為無機鹽溶液，沒有揮發性可以減少有機溶劑的污染，對人和環境都比較友好，為金針菇中β?煙酰胺單核苷酸含量的測定提供新的方法，也可以將此方法應用到其它的食用菌品種中去。

技術領域

本發明涉及成分分析技術領域，具體涉及金針菇中β-煙酰胺單核苷酸的毛細管電泳測定方法。

背景技術

金針菇(Flammulina?velutiper(Fr.)Sing.)學名毛柄金錢菌，又稱毛柄小火菇、構菌、樸菇、冬菇、樸菰、凍菌、金菇、智力菇等。因其菌柄細長，似金針菜，故稱金針菇，屬傘菌目白蘑科金針菇屬，是一種菌藻地衣類。金針菇氨基酸的含量非常豐富，高于一般菇類，尤其是賴氨酸的含量特別高，賴氨酸具有促進兒童智力發育的功能，因此被稱為“增智菇”，是廣為人知的藥食用菌。金針菇干品中含蛋白質8.87％，碳水化合物60.2％，粗纖維達7.4％。金針菇既是一種美味食品，又是較好的保健食品，金針菇的國內外市場日益廣闊。

目前被發現的“長壽藥”β-煙酰胺單核苷酸(NMN)是一種單核苷類化合物，有研究發現NMN能夠顯著改善小鼠的生理機能的衰退，可以增強能量代謝，改善胰島素敏感性和血漿中脂質的分布情況，并且改善眼部功能。據報道現在NMN主要存在于西藍花、毛豆等蔬菜中，未見有關于金針菇中β-煙酰胺單核苷酸含量的研究報道。

目前樣品測定方法主要是以高效液相電泳HPLC為主，HPLC分析對象廣，它只要求樣品能制成溶液,而不需要汽化，因此不受樣品揮發性的約束。HPLC是以經典液相色譜法為基礎,引入GC的理論與實驗方法發展而成的分離分析方法。但是如果樣品純度不夠，容易造成色譜柱中毒是高效液相色譜法測定有效成分的缺點。

毛細管電泳技術(HPCE)源自傳統電泳技術，是傳統電泳技術和現代微柱分離技術相結合的產物，其柱效可比HPLC高1-2個數量級，復雜樣品的特征性也遠遠高于HPLC。具有微量、準確、成本低、污染少、分析時間快、自動化程度高等優點，在臨床醫藥、環境監測及一些中藥的活性成分檢測上發揮了一定的作用。但有關利用毛細管電泳技術測定β-煙酰胺單核苷酸的毛細管電泳研究與應用報道較少。

發明內容

鑒于現有技術存在的問題，本發明的目的在于是提供一種金針菇中β-煙酰胺單核苷酸的毛細管電泳測定方法，該測定方法的建立基于對以下條件的篩選和考察研究：樣品提取方法、緩沖液種類、緩沖液pH值、操作電壓、測定波長、進樣時間以及活性劑的添加種類等重要的電泳條件技術參數，為金針菇中β-煙酰胺單核苷酸含量的測定提供新的方法，也可以將此方法應用到其它的食用菌品種中去。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案。

一種金針菇中β-煙酰胺單核苷酸的毛細管電泳測定方法，該方法具體包括以下步驟。

步驟1、金針菇的預處理：取金針菇60℃烘干，粉碎，過400目篩，得到菌粉。

步驟2、樣品溶液的制備：步驟1制得菌粉按照1克干重加水15毫升提取，65℃超聲30min，過濾后取上清液，將處理好的提取物的上清液用0.22μm孔徑的水系濾膜濾過，4℃保存待用。

步驟3、毛細管電泳分離條件如下：高效毛細管電泳儀，毛細管有效檢測長度57cm，內徑為30μm，電泳緩沖液為30mmol/L硼砂和10mmol/L磷酸二氫鈉緩沖，p?H：9.0-9.2，電泳溫度為25℃，進樣時間為5-8s，進樣壓力為0.5psi，電壓25-35k?V，紫外檢測波長218-254nm。