[發明專利]一種間充質干細胞的保存方法、運輸方法及其處理方法

有效

• 申請號: 202110464315.1
• 申請日: 2021-04-28
• 公開（公告）號: CN113133445B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 蘇杭;趙晶;劉廣芝
• 申請（專利權）人: 河南省人民醫院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/0775
• 代理公司: 北京崇智知識產權代理有限公司 11605
• 代理人: 趙麗娜

本發明涉及細胞儲存領域，尤其涉及一種間充質干細胞的保存方法、運輸方法及其處理方法。間充質干細胞的保存方法包括以下步驟：將溶膠狀態下的溫度敏感性水凝膠溶液與間充質干細胞混合，得到含有間充質干細胞的液態混合液；液態混合液放置于不低于20℃的溫度下保存，此時，溫度敏感性水凝膠為凝膠狀態，間充質干細胞進入靜息狀態。本發明利用溫度敏感性水凝膠在不同溫度下的存在狀態，將間充質干細胞與溶膠狀態下的溫度敏感性水凝膠混合，通過轉換溫度，使得溫度敏感性水凝膠處于凝膠狀態，而其中的間充質干細胞處于靜息狀態，這樣實現了間充質干細胞在常溫下即可保存，降低了間充質干細胞的保存條件，利于間充質干細胞更廣泛的應用。

技術領域

本發明涉及細胞儲存領域，尤其涉及一種間充質干細胞的保存方法、運輸方法及其處理方法。

背景技術

干細胞移植治療是一門先進的醫學技術。干細胞移植治療是把健康的干細胞移植到患者體內，以達到修復或替換受損細胞或組織，從而達到治愈的目的。很多疾病目前是傳統醫藥難以攻克的，利用干細胞再生醫學治療疾病包括神經性疾病、糖尿病、慢性心臟疾病、腎臟病等擁有巨大潛力。

干細胞治療流程涉及細胞采集、細胞培養、細胞移植治療等過程。通常，這些過程的實施地點或者時間并不一致，用于治療的細胞會在不同的地點之間運輸。在常溫或37℃環境中，細胞增殖迅速、代謝旺盛、耗氧高、能耗大，產生的大量氧自由基和脂質過氧化物，必須及時通過更換培養基清除，否則引起環境pH和滲透壓變化，造成細胞死亡。若僅僅增加培養基，細胞在運輸過程中會過度增殖、迅速將培養基消耗殆盡等原因而最終死亡，因此通常采用干冰或者液氮低溫凍存的方法。低溫凍存的細胞送達目的地后接著會被復蘇，復蘇過程需要對溫度的嚴格控制，避免對細胞造成不可逆的損傷，但并非所有的細胞使用機構都配備常規的低溫貯藏設備以及經過相關技術訓練的人員。冷凍運輸要求苛刻、成本高昂、細胞復蘇技術要求較高，并且細胞凍存液中的DMSO具有一定的細胞毒性，可能會給其應用帶來一定風險。因此，尋找一種有效的在非低溫條件下的細胞保存和運輸的方法尤為重要。

發明內容

本發明利用特定濃度的溫敏性水凝膠包裹細胞，在常溫、大氣條件下，為細胞創造保護環境，使細胞進入靜息狀態。運輸過程中，細胞維持低代謝靜息狀態，不再增殖和分化，有效保護細胞存活，受到的穩定保護長達數天。這一方法對細胞運輸條件要求比目前的干冰或液氮凍存運輸更低，甚至可以實現干細胞在不同機構之間快遞運輸。最重要的是，在細胞的臨床應用中，細胞到達目的地后，可通過簡單的物理手段，通過給離心管降溫的方式進行細胞離心收集，并且干細胞的特性不發生改變，細胞在使用前不需任何進一步處理。

基于此，本發明的第一目的在于提供一種間充質干細胞的保存方法，包括以下步驟：

將溶膠狀態下的溫度敏感性水凝膠溶液與間充質干細胞混合，得到含有間充質干細胞的液態混合液；

所述液態混合液放置于不低于20℃的溫度下保存，此時，所述溫度敏感性水凝膠為凝膠狀態，所述間充質干細胞進入靜息狀態。

本發明利用溫度敏感性水凝膠在不同溫度下的存在狀態，將間充質干細胞與溶膠狀態下的溫度敏感性水凝膠混合，通過轉換溫度，使得溫度敏感性水凝膠處于凝膠狀態，而其中的間充質干細胞處于靜息狀態，這樣實現了間充質干細胞在常溫下即可保存，降低了間充質干細胞的保存條件，利于間充質干細胞更廣泛的應用。

在一些可能的實施方式中，所述溫度敏感性水凝膠溶液的溶劑為細胞培養溶液。

本發明中，用于溶解溫度敏感性水凝膠的溶劑選用用于培養或儲存細胞的培養液，以便于細胞更好的適應外界環境，在必要時可給予間充質干細胞補充適當的營養成分，另外在分離時也避免了溶液的轉換而給細胞帶來的損傷。因此，基于上述內容，可選擇合適的溶劑溶解溫度敏感性水凝膠。

如在一些可能的實施方式中，所述溫度敏感性水凝膠溶液的溶劑為液態的DMEM/F-12完全培養基。