[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)慶大霉素C組分的工程菌及其構(gòu)建在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110463433.0 | 申請(qǐng)日： | 2021-04-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113278638A | 公開（公告）日： | 2021-08-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 董澤武;常瑩瑩;滿航;張徳重;嚴(yán)寶冬;孫明 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 黑龍江格林赫思生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/54 | 分類號(hào)： | C12N15/54;C12N15/74;C12N15/90;C12N1/21;C12P19/48;C12R1/29 |
| 代理公司： | 天津企興智財(cái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12226 | 代理人： | 陳雅潔 |
| 地址： | 166400 黑*** | 國(guó)省代碼： | 黑龍江;23 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高產(chǎn) 慶大霉素 組分 工程 及其 構(gòu)建 | ||
1.一種高產(chǎn)慶大霉素C組分的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.權(quán)利要求1所述的基因在構(gòu)建高產(chǎn)慶大霉素C組分工程菌中的應(yīng)用。
3.高產(chǎn)慶大霉素C組分工程菌YC001、YC003和YC004，保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)分別為CCTCC No.M2021345，No.M2021346，No.M2021347。
4.權(quán)利要求3所述的高產(chǎn)慶大霉素C組分工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于：采用位點(diǎn)整合或同源重組進(jìn)行構(gòu)建。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)慶大霉素C組分工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于：位點(diǎn)整合包括以下步驟：
(1)以位點(diǎn)整合型質(zhì)粒為載體，構(gòu)建不同啟動(dòng)子控制GenP表達(dá)的質(zhì)粒，所述質(zhì)粒包括啟動(dòng)子、genP基因，啟動(dòng)子控制genP的表達(dá)；
(2)通過大腸桿菌介導(dǎo)的三親本接合轉(zhuǎn)移方法將所述質(zhì)粒導(dǎo)入刺孢小單孢菌原始菌株；
(3)位點(diǎn)整合方式的GenP過表達(dá)菌株的篩選，首先篩選硫鏈絲菌素抗性菌株，后提取基因組進(jìn)行PCR驗(yàn)證，篩選成功導(dǎo)入啟動(dòng)子-genP片段的菌株。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)慶大霉素C組分工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于：同源重組包括以下步驟：
(1)以復(fù)制型質(zhì)粒為載體，構(gòu)建GenP表達(dá)的同源重組質(zhì)粒，所述質(zhì)粒包括rpsLp-cf啟動(dòng)子、genP基因、上下同源臂，rpsLp-cf啟動(dòng)子控制genP的表達(dá)；
(2)通過大腸桿菌介導(dǎo)的三親本接合轉(zhuǎn)移方法將所述質(zhì)粒導(dǎo)入刺孢小單孢菌原始菌株；
(3)GenP過表達(dá)菌株的篩選，首先篩選有硫鏈絲菌素抗性菌株，經(jīng)傳代從中篩選硫鏈絲菌素敏感菌株，進(jìn)而提取基因組進(jìn)行PCR驗(yàn)證，篩選出rpsLp-cf-genP片段正確整合于染色體的菌株。
7.權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的高產(chǎn)慶大霉素C組分工程菌在生產(chǎn)慶大霉素C組分的應(yīng)用。
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