[發(fā)明專利]一種鑒定SMV-SC3的LAMP引物組、試劑盒及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110458248.2
• 申請日: 2021-04-27
• 公開（公告）號: CN112941243A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設計）人: 岳愛琴;范姝姝;牛景萍;杜維俊;趙晉忠;王敏;李晨;武文娟
• 申請（專利權）人: 山西農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 西安知誠思邁知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 61237
• 代理人: 閔媛媛

1.一種鑒定SMV-SC3的LAMP引物組，其特征在于，包括1對內引物、1對外引物和1對環(huán)引物，序列如下：

內引物SC3-FIP-2：

5’-TGCTCATCATCAAGCTCATATTCAT-ACACTCGAGCAACAAGAAC-3’；

內引物SC3-BIP-2：

5’-TGGTCATGAATGGTTTCATGGT-CCATCCATCATCACCCAC-3’；

外引物SC3-F3-2：5’-CTTGAGTATAAACCTAATCAGGT-3’；

外引物SC3-B3-2：5’-CGGATATTCAATTTGTTCCTCT-3’；

環(huán)引物SC3-LF-2：5’-TTGTACCACGCTTCAAACTGT-3’；

環(huán)引物SC3-LB-2：5’-ATTGACAATGGCACATCTCCAGA-3’。

2.一種鑒定SMV-SC3的LAMP試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1所述LAMP引物組。

3.根據(jù)權利要求2所述的一種鑒定SMV-SC3的LAMP試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括甜菜堿、dNTP Mix、Bst DNA聚合酶、10×buffer、MgSO₄、cDNA模板，SYBR Green I核酸染料和去離子雙蒸水。

4.根據(jù)權利要求2所述的一種鑒定SMV-SC3的LAMP試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中各引物的濃度為：SC3-FIP/SC3-BIP濃度為20μM，SC3-F3/SC3-B3、SC3-LF/SC3-LB濃度為10μM；所述試劑盒中甜菜堿的濃度為5mM，dNTP濃度為10mM，Bst DNA聚合酶濃度為8u/μL，MgSO₄的濃度為25mM，SYBR Green I核酸染料的濃度為1000X。

5.一種如權利要求2所述一種鑒定SMV-SC3的LAMP試劑盒的使用方法，其特征在于，具體按照以下步驟進行：

S1、制備待測樣品的cDNA，作為LAMP反應的cDNA模板；

S2、配制LAMP反應體系，在LAMP反應之前，預先在蓋頂部加入SYBR Green I核酸染料，進行環(huán)介導等溫擴增反應；

S3、結果判斷，若反應體系由橙色變?yōu)闊晒饩G，則待測樣品為陽性，若反應體系保持橙色，則待測樣品為陰性。

6.根據(jù)權利要求5所述一種鑒定SMV-SC3的LAMP試劑盒的使用方法，其特征在于，所述LAMP反應的溫度為64-68℃。

7.根據(jù)權利要求5所述一種鑒定SMV-SC3的LAMP試劑盒的使用方法，其特征在于，所述LAMP反應的甜菜堿的終濃度為0.4-1.2mol/L。