[發明專利]抗CK17蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110449148.3
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113278070B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 胡濱陽;楊清海;陳惠玲;王小亞;周洪輝
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及一種可以識別人CK17抗原的單克隆抗體，分泌細胞株、其制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術方案化學合成CK17蛋白C末端的410?432位氨基酸為抗原肽，偶聯KLH后得到免疫原。所述CK17?KLH蛋白對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗CK17蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株4D2,以及由該細胞株所分泌的抗CK17蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達CK17蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，特別涉及一種抗CK17蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用。

背景技術

細胞角蛋白在不同組織或器官的上皮細胞以及細胞分化的不同階段表達不同型別的細胞角蛋白。在正常宮頸組織中有細胞角蛋白的表達，在正常宮頸組織向癌前病變或者浸潤性腫瘤轉化的過程中，一些細胞角蛋白會發生變化，并且表現出一定的規律性，這一特點表明細胞角蛋白具有顯著的分子多樣性，如：結直腸腺癌通常呈CK20陽性而CK7陰性；在基底樣皮膚腫瘤的發生過程中，CK17可以發揮自身的免疫調節作用，進而促進上皮細胞的增殖和腫瘤的生長。

在正常宮頸組織向宮頸癌和癌前病變轉化的過程中，CKs的表達會發生一系列變化并表現出一定的規律性，尤其是CK17的表達。Smedts等的研究結果顯示,隨著病變由CIN到浸潤癌的改變，CK17的表達會逐漸增高，并由此認為病變表達CK17有可能進展，不表達則有可能消退或持續存在但并不進展。Carrilho等研究64例患者，其中正常10例，CINⅢ10例，宮頸浸潤癌44例，結果CK17在其中的陽性表達率分別為0％、40％、73.2％，說明隨著病變進展，CK17的表達增高，認為CK17是宮頸惡性轉變的特異標志物。Ikeda等研究了134例患者，其中CINⅠ39例，CINⅡ31例，CINⅢ43例，浸潤癌21例，結果CK17的陽性表達率分別為33.3％、58.1％、81.4％和95.2％，CK17陽性同CIN級別的增高相關聯，認為CK17可能在篩查宮頸癌高危病例中發揮作用。王為民等的研究結果顯示，從正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌，隨著病變程度的逐漸加重，CK17的陽性表達率逐漸增高，通過相關性分析，兩者之間呈正相關關系，即宮頸病變程度越重，CK17的陽性表達率越高。由此可以認為，通過CK17的表達情況，可以預測宮頸病變未來的發展趨勢，即表達CK17的宮頸病變，將來很有可能進一步發展，相反，不表達CK17的宮頸病變，將來進一步發展為宮頸癌的可能性很小。

此外，有研究表明在口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中，CK17與口腔鱗狀細胞癌患者的臨床病理特點相關，且CK17高表達和口腔鱗癌患者預后顯著相關，特別是與是否淋巴結轉移顯著相關，CK17陽性表達時淋巴結轉移風險增加6倍，并且在接受手術和放療的患者中，CK17低表達是早期疾病復發和疾病特異性死亡的獨立標志物，CK17低表達的患者疾病復發風險比K17高表達風險增加了約4倍。研究結果表明：CK17和CK19很可能是一種潛在的預測OSCC患者預后的腫瘤標志物。

發明內容

發明人提供了一種抗CK17蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQID NO.5所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的DNA序列為SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的DNA序列為SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別CK17蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體為小鼠IgG_2a亞型單克隆抗體。

進一步地，所述單克隆抗體由保藏號為CGMCC NO 20762的雜交瘤細胞株產生。