[發明專利]靶向M細胞的多表位口服疫苗及其在包蟲疫苗中的應用

有效

• 申請號: 202110447953.2
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113181349B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 丁劍冰;李玉嬌;張峰波;朱玥潔;龐楠楠;馬海梅;張陽;安夢婷;于明凱
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K47/36;A61P33/10;C12N15/62;C12N15/79
• 代理公司: 重慶一葉知秋專利代理事務所(普通合伙) 50277
• 代理人: 劉洪雨

本發明屬于疫苗技術領域，具體公開了靶向M細胞的多表位口服疫苗,包括載體、M細胞的靶向肽Co1、特異性針對犬DLA限制性位點的CD4⁺T細胞表位肽，特異性針對犬DLA限制性位點的CD4⁺T細胞表位肽的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。本發明還公開了上述靶向M細胞的多表位口服疫苗在包蟲疫苗中的應用。本發明提供的靶向M細胞的多表位口服疫苗有效降低小鼠體內包蟲包囊，生產方便，不受免疫操作人員限制。

技術領域

本發明屬于疫苗技術領域，尤其涉及靶向M細胞的多表位口服疫苗及其在包蟲疫苗中的應用。

背景技術

包蟲病(cystic echinococcosis；CE)又稱棘球蚴病，是細粒棘球絳蟲(Echinococcusgranulosus；Eg)的幼蟲棘球蚴寄生于人體及某些動物的肝、肺等臟器所致的一種嚴重的人畜共患慢性寄生蟲疾病。目前，治療時，疫苗預防是防止包蟲病流行的有效措施。

鑒于新疆地區包蟲病高發，嚴重危害牧民健康，又缺乏有效的保護性疫苗的背景，發明人曾作出以下探索：(1)從細粒棘球蚴中克隆EgG1Y162抗原基因，發現無論在基因序列上，還是在氨基酸序列、蛋白結構上，EgG1Y162抗原基因均與國外研究者已研發的用于終末宿主保護的候選疫苗具有高度的相似性，很可能也是終末宿主的保護性抗原；(2)在2009年申請的申請公開號為CN101475938A的中國發明專利申請公開了一種包蟲病抗原基因即EgG1Y162抗原基因及其重組蛋白和應用；(3)在2013年申請的申請公開號為CN103041382A的中國發明專利申請公開了一種細粒棘球蚴重組BCG疫苗及制備方法。

在前述研究的基礎上，發明人發現，基于EgG1Y162抗原基因的注射疫苗具有生產技術限制和對實施免疫操作人員的限制，希望尋求一種能夠有效降低包蟲包囊，生產工藝簡單，可以口服的包蟲病疫苗。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠有效降低小鼠體內包蟲包囊，生產工藝簡單，不受免疫操作人員限制的靶向M細胞的多表位口服疫苗及其在包蟲疫苗中的應用。

為了達到上述目的，本發明提供一種靶向M細胞的多表位口服疫苗，包括載體、M細胞的靶向肽Co1、特異性針對犬DLA限制性位點的CD4⁺T細胞表位肽，特異性針對犬DLA限制性位點的CD4+T細胞表位肽的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。

本發明還公開了上述靶向M細胞的多表位口服疫苗的制備方法，包括以下步驟：

S1、獲取特異性針對犬DLA限制性位點的CD4⁺T細胞表位肽：獲取EgG1Y162抗原的cDNA序列、犬DLA限制性位點DLA-DRB1*011:01蛋白和犬DLA限制性位點DLA-DRB1*015:01蛋白的氨基酸序列，確定特異性針對犬DLA限制性位點的CD4⁺T細胞表位肽；

S2、獲取Co1-Multi-EgG1Y162：將特異性針對犬DLA限制性位點的CD4⁺T細胞表位肽和M細胞的靶向肽Co1通過linker連接，得到Co1-Multi-EgG1Y162；

S3、構建pcDNA3.1-Co1-Multi-EgG1Y162真核表達系統；

S4、獲得pcDNA3.1-Co1-Multi-EgG1Y162蛋白；